宁德市图书馆 38.5 研究实例
内容
根据相关报道的文献，简单阐述金线莲化学成分的研究实例[31]。
38.5.1 实验材料
金线莲药材由福建省漳州市南靖县和溪镇供销社提供，由中国科学院武汉植物研究所王映明教授鉴定。
38.5.2 提取与分离
10kg金线莲全草经粉碎后用甲醇加热回流提取6次，每次2h，过滤，回收溶剂。粗提物加适量水悬浮，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，萃取液浓缩成浸膏得乙酸乙酯部分200g、正丁醇部分1000g。将乙酸乙酯部分经硅胶柱色谱分离，用极性递增的石油醚-乙酸乙酯系统梯度洗脱，合并相同馏分，得到4个组分。组分Ⅱ
（16g）经反复硅胶柱色谱，经石油醚-乙酸乙酯（10:1～10:3）洗脱先后分离获得化合物3（20.3mg），4（15.7mg）。组分Ⅲ（26g）经反复硅胶柱色谱，经石油醚-乙酸乙酯（5:1～5:4）洗脱先后分离获得化合物5（13mg），化合物6（9.8mg），正丁醇部分经反复硅胶柱色谱，以氯仿-甲醇梯度洗脱，再经SephadexLH-20凝胶柱结合重结晶，得到化合物1（126.8mg），2（12.5mg），7（17.6mg），8（56.2mg），9（15.3mg），10（12.7mg）。
38.5.3 结构鉴定
化合物1：无色针晶，mp151.0～153.8℃，Molish反应阳性。IRv（cm）:3400，2926，1769，889，酸水解与标准品共薄层检出葡萄糖。FAB-MSm/z:264[M-H]+，[a]，16-62.8°（c0.64，H2O）。结合1'H-NMR和13C-NMR得知该化合物的分子式为Ci0H16O8。1H-NMR中，δ54.77（（d，J=7.9Hz）为β-D-吡喃葡萄糖的端基质子信号，由端基质子和二碳位质子偶合常数为7.9Hz推测苷键为β-D构型1H-NMR（500MHz，C5D5N）δ2.71（lH，dd，7=18.03Hz，2.5Hz，H-3），2.89（1H，dd，18.16Hz，6.28Hz，H-3），3.18（1H，m，H-5'），3.27（1H，dd，J=8.04Hz，6.09Hz，H-2'），3.29（1H，m，H-4'），3.34（1H，m，H-3'），3.65（1H，dd，J=11.15Hz，3.66Hz，H-6'），3.86（1H，dd，J=11.77Hz，4.7Hz，H-5），4.36（1H，dd，J=11.7Hz，2.3Hz，H-6'），4.40（1H，dd，人10.3Hz，1.5Hz，H-5），4.50（1H，m，H-4），4.77（1H，d，J=7.9Hz，H-l'）；13C-NMR（125MHz，C5D5N）J:37.0（C-3），62.7（C-6'），71.4（04'），74.8（C-2'），75.3（C-5），76.0（C-4），77.9（C-5，），78.1（C-3'），103.6（01）179.0（01）。波谱数据与化合物kinsenoside和goodyerosideA的文献报道[32-34]—致，4位为手性碳。将化合物于甲醇中培养单晶，进行X射线衍射结构分析，确定4位手性碳为R构型，故鉴定化合物1为kinsenoside，即3R；-β-D-l吡喃葡萄糖氧基-丁酸3）内酯，在该植物中为首次发现。
化合物2:白色颗粒（乙酸乙酯），mp71～72℃，EI-MSm/z:285[M+H]+.1H-NMR（500MHz，CDCI3）δ2.33（2H.t，J=7.5Hz），1.63（2H，m），1.28（多个H，m），0.88（3H，t，J=6.5Hz）。且与硬脂酸标准品共薄层，多种展开系统下值一致，故化合物2为硬脂酸。
化合物3:白色颗粒（乙酸乙酯），mp51～53℃，FAB-MSm/z:257[M+H]+=与软脂酸标准品共薄层:多种展开系统下R值一致，故鉴定化合物3为软脂酸。
化合物4:无色针晶（乙酸乙酯），mp135～137℃，混合熔点不下降。Libermann-Burchard反应紫红色。与。-谷甾醇标准品TLC比较，多种展开系统下值一致，故化合物4为β-谷甾醇。
化合物5:无色针晶（氯仿-甲醇），mp156～159℃。与琥珀酸标准品进行TLC对照，多种展开系统下的&值均相同，故鉴定化合物5为琥珀酸。
化合物6:白色粉末（石油醚-乙酸乙酯），mp89～91℃。EI-MSm/z:122[M+H]+。1Rv^（cmu）:3100，2820.2700，1665，1600，1520，1445。从氢谱可以看出该化合物为一个对位取代的苯环，59.41和9.88处有两个活泼氢质子；在DEPT谱中看到5190.1有一个次甲基，推断为醛基。*H-NMR（500MHz，CsDsN）S9.88（1H，s），9.41（1H，s），7.83（2H，dd，J=8.6Hz），7.04（2H，dd，J=8.6Hz）；l3C-NMR（125MHz，C5D5N）δ190.1，163.0，131.9，130.0，115.8。由此推测该化合物为对羟基苯甲醛’其光谱数据与文献[35]报道的对羟基苯甲醛的光谱数据基木一致，鉴定化合物6为对羟基甲醛。
化合物7:白色粉末（乙酸乙酯），mp298-201℃，Libermann-Burchard反应呈阳性，Molish反应呈阳性。与标准品胡萝卜苷（daucosterol）做TLC比较，多种展开系统下的R1值均相同，鉴定化合物7为胡萝卜苷。
化合物8:无色针晶（氯仿，甲醇），mp63.4～64.9℃，Molish反应阳性。FAB-MSm/z:281[M+H]+。IRv京（cm-'）:3400，2917，2908，1716。酸水解与标准品共薄层检出葡萄糖。结合'H-NMR和I3C-NMR得知该化合物的分子式为CnH20O8o54.77（d，J=7.6Hz）为-端基质子，显示有一糖，端基质子和二碳位质子偶合常数7.6Hz推测苷键为P-D构型。1H-NMR（500MHz，CDC13）51.98（2H，tt，J=6.4Hz，6.7Hz，H-3），2.47（2H，t，J=6.4Hz，H-2），3.53（3H，s，—OCH3），3.69（1H，m，H-5'），3.9O（1H，m，H-2'），3.99（1H，m，H-4'），4.06（1H，m，H-3'），4.21（2H，t，J=6.04Hz，H-4），4.35（1H，dd，7=11.61Hz，6.04Hz，H-6'），4.50（1H，dd，>11.7Hz，）=2.3Hz，H-6'），4.77（1H，d，>7.6Hz，H-l'）；l3C-NMR（125MHz，CDC13） 化合物9:黄色羽状结晶（氯仿），mp189.2-192.7℃。IRv看（cnT’）:3400，2500，1605，1430，979.FAB-MSm/z:165[M+H「。结合'H-NMR和l3C-NMR得知该化合物的分子式为C9HQ3，该化合物信号归属为'H-NMR（500MHz，CDC1，）J:6.40（1H，d，J=15.9IHz，H-2），6.92（2H，d，J=8.5Hz，H-3'，5'），7.43（2H，d，J=8.5Hz，H-2'，6'），743（1H，d，<7=15.91Hz，H-3）；，3C-NMR（125MHz，CDCl3） 化学物10:无色针晶（氯仿，甲醇），mp89.0～92.4℃，FAB-MSm/z:[M+H]+，分子式为C6H6O20'H-NMR（500MHz，CDCI3泌6.91（2H，m，H-3，6），7.27（2H，m，H-4.5）；l3C-NMR（125MHz，CDC13）£116.8（C-4，5），120.3（03，6），147.5（C-1，2）。该化合物鉴定为邻苯二酚。
38.5.1 实验材料
金线莲药材由福建省漳州市南靖县和溪镇供销社提供，由中国科学院武汉植物研究所王映明教授鉴定。
38.5.2 提取与分离
10kg金线莲全草经粉碎后用甲醇加热回流提取6次，每次2h，过滤，回收溶剂。粗提物加适量水悬浮，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，萃取液浓缩成浸膏得乙酸乙酯部分200g、正丁醇部分1000g。将乙酸乙酯部分经硅胶柱色谱分离，用极性递增的石油醚-乙酸乙酯系统梯度洗脱，合并相同馏分，得到4个组分。组分Ⅱ
（16g）经反复硅胶柱色谱，经石油醚-乙酸乙酯（10:1～10:3）洗脱先后分离获得化合物3（20.3mg），4（15.7mg）。组分Ⅲ（26g）经反复硅胶柱色谱，经石油醚-乙酸乙酯（5:1～5:4）洗脱先后分离获得化合物5（13mg），化合物6（9.8mg），正丁醇部分经反复硅胶柱色谱，以氯仿-甲醇梯度洗脱，再经SephadexLH-20凝胶柱结合重结晶，得到化合物1（126.8mg），2（12.5mg），7（17.6mg），8（56.2mg），9（15.3mg），10（12.7mg）。
38.5.3 结构鉴定
化合物1：无色针晶，mp151.0～153.8℃，Molish反应阳性。IRv（cm）:3400，2926，1769，889，酸水解与标准品共薄层检出葡萄糖。FAB-MSm/z:264[M-H]+，[a]，16-62.8°（c0.64，H2O）。结合1'H-NMR和13C-NMR得知该化合物的分子式为Ci0H16O8。1H-NMR中，δ54.77（（d，J=7.9Hz）为β-D-吡喃葡萄糖的端基质子信号，由端基质子和二碳位质子偶合常数为7.9Hz推测苷键为β-D构型1H-NMR（500MHz，C5D5N）δ2.71（lH，dd，7=18.03Hz，2.5Hz，H-3），2.89（1H，dd，18.16Hz，6.28Hz，H-3），3.18（1H，m，H-5'），3.27（1H，dd，J=8.04Hz，6.09Hz，H-2'），3.29（1H，m，H-4'），3.34（1H，m，H-3'），3.65（1H，dd，J=11.15Hz，3.66Hz，H-6'），3.86（1H，dd，J=11.77Hz，4.7Hz，H-5），4.36（1H，dd，J=11.7Hz，2.3Hz，H-6'），4.40（1H，dd，人10.3Hz，1.5Hz，H-5），4.50（1H，m，H-4），4.77（1H，d，J=7.9Hz，H-l'）；13C-NMR（125MHz，C5D5N）J:37.0（C-3），62.7（C-6'），71.4（04'），74.8（C-2'），75.3（C-5），76.0（C-4），77.9（C-5，），78.1（C-3'），103.6（01）179.0（01）。波谱数据与化合物kinsenoside和goodyerosideA的文献报道[32-34]—致，4位为手性碳。将化合物于甲醇中培养单晶，进行X射线衍射结构分析，确定4位手性碳为R构型，故鉴定化合物1为kinsenoside，即3R；-β-D-l吡喃葡萄糖氧基-丁酸3）内酯，在该植物中为首次发现。
化合物2:白色颗粒（乙酸乙酯），mp71～72℃，EI-MSm/z:285[M+H]+.1H-NMR（500MHz，CDCI3）δ2.33（2H.t，J=7.5Hz），1.63（2H，m），1.28（多个H，m），0.88（3H，t，J=6.5Hz）。且与硬脂酸标准品共薄层，多种展开系统下值一致，故化合物2为硬脂酸。
化合物3:白色颗粒（乙酸乙酯），mp51～53℃，FAB-MSm/z:257[M+H]+=与软脂酸标准品共薄层:多种展开系统下R值一致，故鉴定化合物3为软脂酸。
化合物4:无色针晶（乙酸乙酯），mp135～137℃，混合熔点不下降。Libermann-Burchard反应紫红色。与。-谷甾醇标准品TLC比较，多种展开系统下值一致，故化合物4为β-谷甾醇。
化合物5:无色针晶（氯仿-甲醇），mp156～159℃。与琥珀酸标准品进行TLC对照，多种展开系统下的&值均相同，故鉴定化合物5为琥珀酸。
化合物6:白色粉末（石油醚-乙酸乙酯），mp89～91℃。EI-MSm/z:122[M+H]+。1Rv^（cmu）:3100，2820.2700，1665，1600，1520，1445。从氢谱可以看出该化合物为一个对位取代的苯环，59.41和9.88处有两个活泼氢质子；在DEPT谱中看到5190.1有一个次甲基，推断为醛基。*H-NMR（500MHz，CsDsN）S9.88（1H，s），9.41（1H，s），7.83（2H，dd，J=8.6Hz），7.04（2H，dd，J=8.6Hz）；l3C-NMR（125MHz，C5D5N）δ190.1，163.0，131.9，130.0，115.8。由此推测该化合物为对羟基苯甲醛’其光谱数据与文献[35]报道的对羟基苯甲醛的光谱数据基木一致，鉴定化合物6为对羟基甲醛。
化合物7:白色粉末（乙酸乙酯），mp298-201℃，Libermann-Burchard反应呈阳性，Molish反应呈阳性。与标准品胡萝卜苷（daucosterol）做TLC比较，多种展开系统下的R1值均相同，鉴定化合物7为胡萝卜苷。
化合物8:无色针晶（氯仿，甲醇），mp63.4～64.9℃，Molish反应阳性。FAB-MSm/z:281[M+H]+。IRv京（cm-'）:3400，2917，2908，1716。酸水解与标准品共薄层检出葡萄糖。结合'H-NMR和I3C-NMR得知该化合物的分子式为CnH20O8o54.77（d，J=7.6Hz）为-端基质子，显示有一糖，端基质子和二碳位质子偶合常数7.6Hz推测苷键为P-D构型。1H-NMR（500MHz，CDC13）51.98（2H，tt，J=6.4Hz，6.7Hz，H-3），2.47（2H，t，J=6.4Hz，H-2），3.53（3H，s，—OCH3），3.69（1H，m，H-5'），3.9O（1H，m，H-2'），3.99（1H，m，H-4'），4.06（1H，m，H-3'），4.21（2H，t，J=6.04Hz，H-4），4.35（1H，dd，7=11.61Hz，6.04Hz，H-6'），4.50（1H，dd，>11.7Hz，）=2.3Hz，H-6'），4.77（1H，d，>7.6Hz，H-l'）；l3C-NMR（125MHz，CDC13）
