宁德市图书馆 内容
37.1 植物资源
金线吊葫芦，即葡萄科（Vitaceae）崖爬藤属植物三叶崖爬藤hemsleyanumDielsetGilg）的全草，为畲族常用药材。金线吊葫芦又名三叶青、金丝吊葫芦、蛇附子、石老鼠等。2015年版《浙江省中药炮制规范》收载的三叶青则指的是三叶崖爬藤的新鲜或干燥块根[1]。
三叶崖爬藤[2]，草质藤本。小枝纤细，有纵棱纹，无毛或被疏柔毛。须卷不分枝，相隔2节间断与叶对生。叶为3小叶，小叶披针形、长椭圆披针形或卵披针形，长3～10cm，宽1.5～3cm，顶端渐尖，稀急尖，基部楔形或圆形，侧生小叶基部不对称，近圆形，边缘每侧有4～6个锯齿，锯齿细或有时较粗，上面绿色，下面浅绿色，两面均无毛；侧脉5～6对，网脉两面不明显，无毛；叶柄长2～7.5cm，中央小叶柄长.0.5～1.8cm，侧生小叶柄较短，长0.3～0.5cm.无毛或被疏柔毛。花序腋生，长1～5cm，比叶柄短、近等长或较叶柄长，下部有节，节上有苞片，或假顶生而基部无节和苞片，二级分枝通常4，集生成伞形，花二歧状着生在分枝末端；花序梗长1.2～2.5cm，被短柔毛；花梗长1～2.5mm，通常被灰色短柔毛；花蕾卵圆形，高1.5～2mm，顶端圆形；萼蝶形，萼齿细小，卵状三角形；花瓣4，卵圆形，高1.3～1.8mm.顶端有小角，外展，无毛；雄蕊4，花药黄色；花盘明显，4浅裂；子房陷在花盘中呈短圆锥状，花柱短，柱头4裂。果实近球形或倒卵球形，直径约0.6cm，有种子1颗；种子倒卵椭圆形，顶端微凹，基部圆钝，表面光滑，种脐在种子背面中部向上呈椭圆形，腹面两侧洼穴呈沟状，从下部近1/4处向上斜展直达种子顶端，花期4～6月，果期8～11月。
产于江苏、浙江、江西、福建、台湾、广东、广西、湖北、湖南、四川、贵州、云南、西藏。生于山坡灌丛、山谷、溪边林下岩石缝中，海拔300～1300m。模式标本采自湖北宜昌。
37.2 典籍记载与应用
【采收加工】冬季采收，洗净，鲜用或干燥。
【炮制】取原药，润软，切厚片，干燥。
【药材性状】块根呈纺锤形、葫芦形、卵圆形或椭圆形，长0.5～2.5cm，宽0.3～1.5cm。表面棕褐色，多数较光滑，或有皱缩和少数皮孔状的小瘤状隆起，有的还有凹陷，其内残留棕褐色细根。质硬而脆，断面稍粗糙，类白色，粉性。气微，味微甘。
【性味】味苦，性平。
【主治】小儿高热惊风，百日咳，疔疮痈疽，淋巴结结核，毒蛇咬伤，肺炎，肝炎，肾炎，风湿痹痛。
【用法用量】内服煎汤3～12g；外用适量，捣敷或磨汁涂。
【注意事项】孕妇禁服。
37.3 化学成分研究
目前对三叶青化学成分的研究还较少，至今为止从该植物中分离得到的化合物主要有黄酮类、三萜甾醇类、有机酸类等成分。
37.3.1 三叶青块根中化学成分
三叶青在中药中以块根入药，故对块根化学成分的研究较多。杨大坚等[3]从三叶青根中分离鉴定得到6′-0-苯甲酰基胡萝卜苷、胡萝卜苷和β-谷甾醇。李瑛琦等[4]从三叶青块根乙酸乙酯萃取物中分离得到山奈酚、槲皮素和山奈酚-3-0-新橙皮糖苷。毛一亮等[5]从石油醚萃取物中分离得到4种化合物，分别鉴定为蒲公英萜酮、蒲公英萜醇、谷甾醇和麦角甾醇。
霍昕等[6]从三叶青块根乙醚提取物中分离得到21个化合物，并鉴定出18个组分，分别是亚油酸、棕桐酸、油酸、二苯胺、亚麻酸甲酯、硬脂酸、樟脑、2，3-丁二醇、己酸、苯甲酸、苯乙醇、苯酚、6，10，14-三甲基-2-十五烷酮、异丙苯、豆蔻酸、十五酸、补骨脂素、十七酸，其中前6种提取物含量较高。
37.3.2 三叶青地上部分化学成分
针对三叶青地上部分的研究较少，但也有所进展。刘东等[7，8]从三叶青地上部分中分离出16种化合物，分别是蒲公英萜醇、蒲公英菇酮、0-谷甾醇、麦角甾醇、a-香树脂醇、三十二酸、水杨酸、丁二酸、胡萝卜苷、山奈酚-7-0-p-L-吡喃鼠李糖基-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、没食子酸乙酷、甘露醇、环四谷氨肽及3种黄酮苷类化合物，分别为芹菜素-6-a-L-吡喃鼠李糖基-（l-4）-a-L-吡喃阿拉伯糖苷（崖爬藤苷）、芹菜素-8-a-L-吡喃鼠李糖基-（|-4）-a-L-吡喃阿拉伯糖苷（异崖爬藤苷）和芹菜素-6，8-二-C-β-D-吡喃葡萄糖苷[9]。蔡韦炜等[10]从三叶青地上部分鉴定出酚类、氨基酸类、黄酮类、皂苷、甾萜类、挥发油和油脂等成分。杨大坚等[3]鉴定出黄酮类、没食子酸和花青素类化合物。此外，付金娥等[11]采用电感耦合等离子体-发射光谱法（ICP-AES）分别测定三叶青药材中的微量元素，以Mg、Fe、Zn、Zn、Ba等含量较高，而Cd、Pb和As含量极低或未检出。
37.4 药理活性研究
37.4.1 抗肿瘤作用
丁钢强等[12]在2008年研究发现，三叶青提取物中乙酸乙酯溶解部分对人肝癌HepG2细胞活性具有较强的抑制作用，正丁醇部分也有一定的作用；季绍勇[13]报道以三叶青为主要成分的金丝地甲胶囊，对LEWIS肺肿瘤细胞、SMMC-7721肝肿瘤细胞、HL-60人淋巴母细胞性白血病细胞、SCG-7901胃肿瘤细胞及HCT-116结肠肿瘤细胞的生长有明显抑制效果；魏克民等[14]句在临床上研究表明，用三叶青、黄芪、人参皂苷配制而成的金茂片治疗恶性肿瘤120例，完全缓解52例，部分缓解42例，稳定18例，进展8例，完全缓解及部分缓解共94例，总有效率78.33%，这说明三叶青对防治恶性肿瘤确有一定作用，并且指出由杭州天惠医药科技有限公司研制开发生产的“金芪片”，其主要成分有三叶青、黄芪提取物、人参皂苷，是一种适合肿瘤患者及其他免疫力低下的人群长期服用的功能性保健食品；徐彩菊等[15]在对三叶青提取物抗肿瘤抑制进行的初探中认为，调节机体免疫功能是三叶青提取物抗肿瘤的重要机制之一。程伟等[16]的研究中发现，在肺癌A549细胞中加入不同浓度的三叶青提取物后，共培养48h后检测吸光值，发现随着三叶青提取物浓度的增加，对肺癌A549细胞的抑制作用明显增强，在浓度达到10～49mol/mL后，抑制作用与对照组比较有显著差异。
37.4.2 抗病毒作用
杨学楼等21通过三叶青提取物含氮碱A和含酮物F，粗全浸提取物S1和S2在小白鼠体内和鸡胚成纤维细胞上的实验证实，以上4种药物均显示出不同程度的抗病毒作用。其中A和F对流感病毒PR3株及仙台病毒（小白鼠肺适应株）有较强的抗病毒效果。此外，杨大坚等[3]发现三叶青脂溶性成分有显著抗病毒及抗出血热的作用。
37.4.3 抗炎、镇痛及解毒作用
资古明等[18]研究发现，小鼠腹腔注射三叶青块根提取物，在热板法和苯醒法致痛模型上均有明显的镇痛效果，以及对二甲苯引起小鼠耳肿胀有明显抑制作用。黄真等发现三叶青提取物能明显抑制小鼠腹腔毛细血管炎性渗出，抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀及10%蛋清致大鼠足跖肿胀，主要表现为减少乙酸致小鼠扭体次数，提高热板法小鼠痛阈值，并降低干酵母和2，4-二硝基苯酚致大鼠发热模型的体温，从而证实了三叶青具有较好的抗炎、镇痛及解热作用。三叶青石膏汤治疗小儿外感发热72例，总有效率94.4%，加味后还可治疗以下疾病，如伴鼻塞、流涕者加荆芥、防风；伴咳嗽者加浙贝母、前胡；伴扁桃腺炎者加射干、山豆根；伴疱疹性咽腮腺炎者加柴胡、夏枯草等[20]。
37.4.4 保肝作用
有研究发现，三叶青能促进家兔肝细胞吸收和吞噬放射性四碘四氯荧光素，说明三叶青具有加强肝脏功能的作用。实验表明，三叶青提取物能够明显降低四氯化碳（CCL4）致小鼠肝损伤后丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）增高，减轻肝细胞变性、炎症浸润及坏死等病变，降低肝中丙二醛（MDA）生成量。由此表明，三叶青提取物对CCL，所致肝损伤具有一定的保护作用[21-23]。张同远等[24]研究发现，三叶青可显著抑制透明质酸（HA）、层黏蛋白（LN）的异常增高，提示了三叶青抗肝纤维化作用良好。
37.4.5 急性毒性
江月仙等[25，26]将三叶青按《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）中“食品安全性毒理学评价试验”进行实验，发现第一阶段大鼠经口急性毒性半数致死量（LD50）雌雄两性别均大于100.0g/kg体重；小鼠经口急性LD50雌雄两性别均大于40.0g/kg体重。按急性毒性分级标准判定，属实际无毒。第二阶段Ames实验结果为阴性，小鼠骨髓细胞微核实验和小鼠精子畸形实验结果均为阴性，说明三叶青未显示有致突变性。
37.4.6 免疫力调节作用
口服三叶青脂溶性提取物，可以使小鼠体内肿瘤坏死因子-a（TNF-a）和干扰素-丫（IFN-y）含量增高，增强单核-巨噬细胞吞噬功能"1。对三叶青水提物研究表明，其能拮抗烫伤致大鼠血清IgA含量降低、回肠黏液中S-lgA含量降低及肠黏膜中MDA含量升高，能拮抗烫伤致大鼠脾脏淋巴细胞增殖能力下降、NK细胞活性降低及烫伤引起的血清白介素-6（IL-6）水平增加作用，对烫伤引起的肠道局部和全身免疫紊乱有纠正作用[21]。
37.5 研究实例
根据相关报道的文献，简单阐述三叶青地上部分化学成分分析的实例
37.5.1 实验材料
三叶青地上部分的产地为福建省福安市，由福建中医药大学药学院范世明高级实验师鉴定确认。
37.5.2 实验方法与结果
1）水提取法
称取三叶青地上部分粉末5g，置于100mL锥形瓶中，加60mL蒸馏水，室温浸泡过夜。过滤，滤液供检查氨基酸、蛋白质用。将上述剩余的冷水浸泡液连同滤渣置于60℃的水浴上加热1h，趁热过滤，滤液冷却至室温后供检查糖、多糖、有机酸、皂苷、酚类、鞣质成分用。
2） 乙醇提取法
取三叶青地上部分粉末10g，加10倍量95%的乙醇，水浴加热回流lh，过滤，滤液分成2份：1份作为乙醇提取液，供检查酚类、鞣质及有机酸用；1份浓缩成稠膏，再一分为二，放冷后，1/2加2%盐酸溶解，过滤，滤液供检查生物碱用，滤渣溶解后供检查黄酮、蒽醌用；1/2用10mL乙酸乙酯溶解，用5%氢氧化钠将乙酸乙酯层水洗到中性，乙酸乙酯层用作香豆素、萜类内酯、强心苷检查。
3）石油醚提取法
三叶青地上部分粉末1g，加10mL石油醚（沸程60～90℃），放置2～3h，过滤，滤液置表面皿上挥干，残留物供检验甾体、三萜类、挥发油、油脂用。
4）有机溶剂分离萃取法及薄层色谱鉴别
称取三叶青地上部分粉末50g，加300mL乙醇，在水浴上回流1.5h（注意添加乙醇，使之保持一定体积），过滤。取乙醇提取液，置蒸发皿中，挥干溶剂，得稠膏，加50mL蒸馏水溶解，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇溶剂萃取，得石油醚层、氯仿层、乙酸乙酯层、正丁醇层萃取液，分别回收浓缩。对石油醚层萃取液进行薄层色谱（TLC）鉴别，经实验优选展开剂为石油醚-乙酸乙酯（8:2），采用浓硫酸-香草醛喷雾显色，在自然光下观察检视斑点颜色，再置紫外光灯下，365nm波长处检视。对氯仿层、乙酸乙酯层、正丁醇层萃取液进行TLC鉴别，以氯仿-甲醇-水-乙酸（7：1：0.3：2）为展开剂，采用3%三氯化铝乙醇喷雾显色，365nm波长处检视。
5）结果分析
结果表明三叶青地上部分主要含有黄酮类、氨基酸类、强心苷类、甾体类、油脂类成分，鉴别结果见表37-1
石油醚萃取部位的薄层色谱分离分析显示，自然光下呈6个红色斑点及2个绿色斑点；365nm波长处呈5个白色荧光斑点及6个红色荧光斑点。结果表明三叶青地上部分石油醚萃取部位含有甾萜类及油脂类成分。
氯仿萃取部位、乙酸乙酯萃取部位、正丁醇萃取部位的薄层色谱分离分析显示，365nm波长处氯仿萃取部位无荧光斑点；乙酸乙酯萃取部位呈1个蓝色荧光斑点和2个黄色荧光斑点；正丁醇萃取部位呈4个黄色荧光斑点。结果表明三叶青地上部分乙酸乙酢与正丁醇萃取部位含有黄酮及其昔类化合物。
37.5.3 讨论
（1）本实验明确了三叶青地上部分含有酚类、氨基酸、糖类、黄酮类、萜类、强心苷类、甾体类、油脂类成分，其中黄酮类成分主要存在于三叶青地上部分乙酸乙酯与正丁醇萃取部位，甾萜类成分存在于石油醚萃取部位。
（2）用薄层色谱法筛选石油醚-乙酸乙酯（90：10）、（85:15）、（80：20）、（70：30）4种不同比例展开剂，结果显示以石油醚-乙酸乙酯（80:20）为展开剂时，各斑点分离效果最好。
（3）用薄层色谱法采用正丁醇酸-水、氯仿-甲醇、氯仿-甲醇-水、氯仿-甲醇-乙酸-水4种不同展开剂进行比较，结果以氯仿-甲醇-乙酸-水（7：1：0.3：2）作为展开剂时，成点性最好，黄酮各成分斑点的分离效果最好。
37.6 临床使用
（1）治疗病毒性脑膜炎：取干燥块根，成人5钱，儿童3钱，水煎服，每日1剂。治疗104例，服药3剂后86.5%的患者症状即行消失，服4剂后全部治愈。但停药后易复发，故治愈后须连续再服几剂以巩固疗效。治疗期间和治疗后未发现明显不良反应。此外，.该品也可应用于其他病毒性疾病，如异性脑炎、病毒性肺炎、黄疸型肝炎等。
（2）治疗急性支气管炎、肺炎、咽喉炎、肠炎、胆道感染及眼眶蜂窝织炎等感染性疾病：取三叶青块根加工制成注射液，每支2mL，每1mL含生药2g。每次2～4mL肌肉注射，每次2～4次。共治84例，除胆道感染曾合并应用清热利胆中草药外，其余均以三叶青为主，部分曾加用对症治疗，结果治愈52例，好转12例，无效20例。
37.7 总结与展望
近年来，有报道三叶青在临床应用于抗癌、抗艾滋病毒、血液病、心脑血管疾病以及小儿外感高热等。当前对三叶青的研究应用主要是块根部分，但由于药源稀缺，市场对于三叶青资源有较大需求。当前，不同产地三叶青在质量和价格上差异很大，由此引起的药材种植、销售和加工的多个问题已经引起业界关注，需要加强药材品质方面的深入研究。此外，积极开展三叶青地上部分与块根化学成分和药理作用的比较研究，对于积极利用三叶青资源有很大意义。
参考文献
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金线吊葫芦，即葡萄科（Vitaceae）崖爬藤属植物三叶崖爬藤hemsleyanumDielsetGilg）的全草，为畲族常用药材。金线吊葫芦又名三叶青、金丝吊葫芦、蛇附子、石老鼠等。2015年版《浙江省中药炮制规范》收载的三叶青则指的是三叶崖爬藤的新鲜或干燥块根[1]。
三叶崖爬藤[2]，草质藤本。小枝纤细，有纵棱纹，无毛或被疏柔毛。须卷不分枝，相隔2节间断与叶对生。叶为3小叶，小叶披针形、长椭圆披针形或卵披针形，长3～10cm，宽1.5～3cm，顶端渐尖，稀急尖，基部楔形或圆形，侧生小叶基部不对称，近圆形，边缘每侧有4～6个锯齿，锯齿细或有时较粗，上面绿色，下面浅绿色，两面均无毛；侧脉5～6对，网脉两面不明显，无毛；叶柄长2～7.5cm，中央小叶柄长.0.5～1.8cm，侧生小叶柄较短，长0.3～0.5cm.无毛或被疏柔毛。花序腋生，长1～5cm，比叶柄短、近等长或较叶柄长，下部有节，节上有苞片，或假顶生而基部无节和苞片，二级分枝通常4，集生成伞形，花二歧状着生在分枝末端；花序梗长1.2～2.5cm，被短柔毛；花梗长1～2.5mm，通常被灰色短柔毛；花蕾卵圆形，高1.5～2mm，顶端圆形；萼蝶形，萼齿细小，卵状三角形；花瓣4，卵圆形，高1.3～1.8mm.顶端有小角，外展，无毛；雄蕊4，花药黄色；花盘明显，4浅裂；子房陷在花盘中呈短圆锥状，花柱短，柱头4裂。果实近球形或倒卵球形，直径约0.6cm，有种子1颗；种子倒卵椭圆形，顶端微凹，基部圆钝，表面光滑，种脐在种子背面中部向上呈椭圆形，腹面两侧洼穴呈沟状，从下部近1/4处向上斜展直达种子顶端，花期4～6月，果期8～11月。
产于江苏、浙江、江西、福建、台湾、广东、广西、湖北、湖南、四川、贵州、云南、西藏。生于山坡灌丛、山谷、溪边林下岩石缝中，海拔300～1300m。模式标本采自湖北宜昌。
37.2 典籍记载与应用
【采收加工】冬季采收，洗净，鲜用或干燥。
【炮制】取原药，润软，切厚片，干燥。
【药材性状】块根呈纺锤形、葫芦形、卵圆形或椭圆形，长0.5～2.5cm，宽0.3～1.5cm。表面棕褐色，多数较光滑，或有皱缩和少数皮孔状的小瘤状隆起，有的还有凹陷，其内残留棕褐色细根。质硬而脆，断面稍粗糙，类白色，粉性。气微，味微甘。
【性味】味苦，性平。
【主治】小儿高热惊风，百日咳，疔疮痈疽，淋巴结结核，毒蛇咬伤，肺炎，肝炎，肾炎，风湿痹痛。
【用法用量】内服煎汤3～12g；外用适量，捣敷或磨汁涂。
【注意事项】孕妇禁服。
37.3 化学成分研究
目前对三叶青化学成分的研究还较少，至今为止从该植物中分离得到的化合物主要有黄酮类、三萜甾醇类、有机酸类等成分。
37.3.1 三叶青块根中化学成分
三叶青在中药中以块根入药，故对块根化学成分的研究较多。杨大坚等[3]从三叶青根中分离鉴定得到6′-0-苯甲酰基胡萝卜苷、胡萝卜苷和β-谷甾醇。李瑛琦等[4]从三叶青块根乙酸乙酯萃取物中分离得到山奈酚、槲皮素和山奈酚-3-0-新橙皮糖苷。毛一亮等[5]从石油醚萃取物中分离得到4种化合物，分别鉴定为蒲公英萜酮、蒲公英萜醇、谷甾醇和麦角甾醇。
霍昕等[6]从三叶青块根乙醚提取物中分离得到21个化合物，并鉴定出18个组分，分别是亚油酸、棕桐酸、油酸、二苯胺、亚麻酸甲酯、硬脂酸、樟脑、2，3-丁二醇、己酸、苯甲酸、苯乙醇、苯酚、6，10，14-三甲基-2-十五烷酮、异丙苯、豆蔻酸、十五酸、补骨脂素、十七酸，其中前6种提取物含量较高。
37.3.2 三叶青地上部分化学成分
针对三叶青地上部分的研究较少，但也有所进展。刘东等[7，8]从三叶青地上部分中分离出16种化合物，分别是蒲公英萜醇、蒲公英菇酮、0-谷甾醇、麦角甾醇、a-香树脂醇、三十二酸、水杨酸、丁二酸、胡萝卜苷、山奈酚-7-0-p-L-吡喃鼠李糖基-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、没食子酸乙酷、甘露醇、环四谷氨肽及3种黄酮苷类化合物，分别为芹菜素-6-a-L-吡喃鼠李糖基-（l-4）-a-L-吡喃阿拉伯糖苷（崖爬藤苷）、芹菜素-8-a-L-吡喃鼠李糖基-（|-4）-a-L-吡喃阿拉伯糖苷（异崖爬藤苷）和芹菜素-6，8-二-C-β-D-吡喃葡萄糖苷[9]。蔡韦炜等[10]从三叶青地上部分鉴定出酚类、氨基酸类、黄酮类、皂苷、甾萜类、挥发油和油脂等成分。杨大坚等[3]鉴定出黄酮类、没食子酸和花青素类化合物。此外，付金娥等[11]采用电感耦合等离子体-发射光谱法（ICP-AES）分别测定三叶青药材中的微量元素，以Mg、Fe、Zn、Zn、Ba等含量较高，而Cd、Pb和As含量极低或未检出。
37.4 药理活性研究
37.4.1 抗肿瘤作用
丁钢强等[12]在2008年研究发现，三叶青提取物中乙酸乙酯溶解部分对人肝癌HepG2细胞活性具有较强的抑制作用，正丁醇部分也有一定的作用；季绍勇[13]报道以三叶青为主要成分的金丝地甲胶囊，对LEWIS肺肿瘤细胞、SMMC-7721肝肿瘤细胞、HL-60人淋巴母细胞性白血病细胞、SCG-7901胃肿瘤细胞及HCT-116结肠肿瘤细胞的生长有明显抑制效果；魏克民等[14]句在临床上研究表明，用三叶青、黄芪、人参皂苷配制而成的金茂片治疗恶性肿瘤120例，完全缓解52例，部分缓解42例，稳定18例，进展8例，完全缓解及部分缓解共94例，总有效率78.33%，这说明三叶青对防治恶性肿瘤确有一定作用，并且指出由杭州天惠医药科技有限公司研制开发生产的“金芪片”，其主要成分有三叶青、黄芪提取物、人参皂苷，是一种适合肿瘤患者及其他免疫力低下的人群长期服用的功能性保健食品；徐彩菊等[15]在对三叶青提取物抗肿瘤抑制进行的初探中认为，调节机体免疫功能是三叶青提取物抗肿瘤的重要机制之一。程伟等[16]的研究中发现，在肺癌A549细胞中加入不同浓度的三叶青提取物后，共培养48h后检测吸光值，发现随着三叶青提取物浓度的增加，对肺癌A549细胞的抑制作用明显增强，在浓度达到10～49mol/mL后，抑制作用与对照组比较有显著差异。
37.4.2 抗病毒作用
杨学楼等21通过三叶青提取物含氮碱A和含酮物F，粗全浸提取物S1和S2在小白鼠体内和鸡胚成纤维细胞上的实验证实，以上4种药物均显示出不同程度的抗病毒作用。其中A和F对流感病毒PR3株及仙台病毒（小白鼠肺适应株）有较强的抗病毒效果。此外，杨大坚等[3]发现三叶青脂溶性成分有显著抗病毒及抗出血热的作用。
37.4.3 抗炎、镇痛及解毒作用
资古明等[18]研究发现，小鼠腹腔注射三叶青块根提取物，在热板法和苯醒法致痛模型上均有明显的镇痛效果，以及对二甲苯引起小鼠耳肿胀有明显抑制作用。黄真等发现三叶青提取物能明显抑制小鼠腹腔毛细血管炎性渗出，抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀及10%蛋清致大鼠足跖肿胀，主要表现为减少乙酸致小鼠扭体次数，提高热板法小鼠痛阈值，并降低干酵母和2，4-二硝基苯酚致大鼠发热模型的体温，从而证实了三叶青具有较好的抗炎、镇痛及解热作用。三叶青石膏汤治疗小儿外感发热72例，总有效率94.4%，加味后还可治疗以下疾病，如伴鼻塞、流涕者加荆芥、防风；伴咳嗽者加浙贝母、前胡；伴扁桃腺炎者加射干、山豆根；伴疱疹性咽腮腺炎者加柴胡、夏枯草等[20]。
37.4.4 保肝作用
有研究发现，三叶青能促进家兔肝细胞吸收和吞噬放射性四碘四氯荧光素，说明三叶青具有加强肝脏功能的作用。实验表明，三叶青提取物能够明显降低四氯化碳（CCL4）致小鼠肝损伤后丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）增高，减轻肝细胞变性、炎症浸润及坏死等病变，降低肝中丙二醛（MDA）生成量。由此表明，三叶青提取物对CCL，所致肝损伤具有一定的保护作用[21-23]。张同远等[24]研究发现，三叶青可显著抑制透明质酸（HA）、层黏蛋白（LN）的异常增高，提示了三叶青抗肝纤维化作用良好。
37.4.5 急性毒性
江月仙等[25，26]将三叶青按《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）中“食品安全性毒理学评价试验”进行实验，发现第一阶段大鼠经口急性毒性半数致死量（LD50）雌雄两性别均大于100.0g/kg体重；小鼠经口急性LD50雌雄两性别均大于40.0g/kg体重。按急性毒性分级标准判定，属实际无毒。第二阶段Ames实验结果为阴性，小鼠骨髓细胞微核实验和小鼠精子畸形实验结果均为阴性，说明三叶青未显示有致突变性。
37.4.6 免疫力调节作用
口服三叶青脂溶性提取物，可以使小鼠体内肿瘤坏死因子-a（TNF-a）和干扰素-丫（IFN-y）含量增高，增强单核-巨噬细胞吞噬功能"1。对三叶青水提物研究表明，其能拮抗烫伤致大鼠血清IgA含量降低、回肠黏液中S-lgA含量降低及肠黏膜中MDA含量升高，能拮抗烫伤致大鼠脾脏淋巴细胞增殖能力下降、NK细胞活性降低及烫伤引起的血清白介素-6（IL-6）水平增加作用，对烫伤引起的肠道局部和全身免疫紊乱有纠正作用[21]。
37.5 研究实例
根据相关报道的文献，简单阐述三叶青地上部分化学成分分析的实例
37.5.1 实验材料
三叶青地上部分的产地为福建省福安市，由福建中医药大学药学院范世明高级实验师鉴定确认。
37.5.2 实验方法与结果
1）水提取法
称取三叶青地上部分粉末5g，置于100mL锥形瓶中，加60mL蒸馏水，室温浸泡过夜。过滤，滤液供检查氨基酸、蛋白质用。将上述剩余的冷水浸泡液连同滤渣置于60℃的水浴上加热1h，趁热过滤，滤液冷却至室温后供检查糖、多糖、有机酸、皂苷、酚类、鞣质成分用。
2） 乙醇提取法
取三叶青地上部分粉末10g，加10倍量95%的乙醇，水浴加热回流lh，过滤，滤液分成2份：1份作为乙醇提取液，供检查酚类、鞣质及有机酸用；1份浓缩成稠膏，再一分为二，放冷后，1/2加2%盐酸溶解，过滤，滤液供检查生物碱用，滤渣溶解后供检查黄酮、蒽醌用；1/2用10mL乙酸乙酯溶解，用5%氢氧化钠将乙酸乙酯层水洗到中性，乙酸乙酯层用作香豆素、萜类内酯、强心苷检查。
3）石油醚提取法
三叶青地上部分粉末1g，加10mL石油醚（沸程60～90℃），放置2～3h，过滤，滤液置表面皿上挥干，残留物供检验甾体、三萜类、挥发油、油脂用。
4）有机溶剂分离萃取法及薄层色谱鉴别
称取三叶青地上部分粉末50g，加300mL乙醇，在水浴上回流1.5h（注意添加乙醇，使之保持一定体积），过滤。取乙醇提取液，置蒸发皿中，挥干溶剂，得稠膏，加50mL蒸馏水溶解，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇溶剂萃取，得石油醚层、氯仿层、乙酸乙酯层、正丁醇层萃取液，分别回收浓缩。对石油醚层萃取液进行薄层色谱（TLC）鉴别，经实验优选展开剂为石油醚-乙酸乙酯（8:2），采用浓硫酸-香草醛喷雾显色，在自然光下观察检视斑点颜色，再置紫外光灯下，365nm波长处检视。对氯仿层、乙酸乙酯层、正丁醇层萃取液进行TLC鉴别，以氯仿-甲醇-水-乙酸（7：1：0.3：2）为展开剂，采用3%三氯化铝乙醇喷雾显色，365nm波长处检视。
5）结果分析
结果表明三叶青地上部分主要含有黄酮类、氨基酸类、强心苷类、甾体类、油脂类成分，鉴别结果见表37-1
石油醚萃取部位的薄层色谱分离分析显示，自然光下呈6个红色斑点及2个绿色斑点；365nm波长处呈5个白色荧光斑点及6个红色荧光斑点。结果表明三叶青地上部分石油醚萃取部位含有甾萜类及油脂类成分。
氯仿萃取部位、乙酸乙酯萃取部位、正丁醇萃取部位的薄层色谱分离分析显示，365nm波长处氯仿萃取部位无荧光斑点；乙酸乙酯萃取部位呈1个蓝色荧光斑点和2个黄色荧光斑点；正丁醇萃取部位呈4个黄色荧光斑点。结果表明三叶青地上部分乙酸乙酢与正丁醇萃取部位含有黄酮及其昔类化合物。
37.5.3 讨论
（1）本实验明确了三叶青地上部分含有酚类、氨基酸、糖类、黄酮类、萜类、强心苷类、甾体类、油脂类成分，其中黄酮类成分主要存在于三叶青地上部分乙酸乙酯与正丁醇萃取部位，甾萜类成分存在于石油醚萃取部位。
（2）用薄层色谱法筛选石油醚-乙酸乙酯（90：10）、（85:15）、（80：20）、（70：30）4种不同比例展开剂，结果显示以石油醚-乙酸乙酯（80:20）为展开剂时，各斑点分离效果最好。
（3）用薄层色谱法采用正丁醇酸-水、氯仿-甲醇、氯仿-甲醇-水、氯仿-甲醇-乙酸-水4种不同展开剂进行比较，结果以氯仿-甲醇-乙酸-水（7：1：0.3：2）作为展开剂时，成点性最好，黄酮各成分斑点的分离效果最好。
37.6 临床使用
（1）治疗病毒性脑膜炎：取干燥块根，成人5钱，儿童3钱，水煎服，每日1剂。治疗104例，服药3剂后86.5%的患者症状即行消失，服4剂后全部治愈。但停药后易复发，故治愈后须连续再服几剂以巩固疗效。治疗期间和治疗后未发现明显不良反应。此外，.该品也可应用于其他病毒性疾病，如异性脑炎、病毒性肺炎、黄疸型肝炎等。
（2）治疗急性支气管炎、肺炎、咽喉炎、肠炎、胆道感染及眼眶蜂窝织炎等感染性疾病：取三叶青块根加工制成注射液，每支2mL，每1mL含生药2g。每次2～4mL肌肉注射，每次2～4次。共治84例，除胆道感染曾合并应用清热利胆中草药外，其余均以三叶青为主，部分曾加用对症治疗，结果治愈52例，好转12例，无效20例。
37.7 总结与展望
近年来，有报道三叶青在临床应用于抗癌、抗艾滋病毒、血液病、心脑血管疾病以及小儿外感高热等。当前对三叶青的研究应用主要是块根部分，但由于药源稀缺，市场对于三叶青资源有较大需求。当前，不同产地三叶青在质量和价格上差异很大，由此引起的药材种植、销售和加工的多个问题已经引起业界关注，需要加强药材品质方面的深入研究。此外，积极开展三叶青地上部分与块根化学成分和药理作用的比较研究，对于积极利用三叶青资源有很大意义。
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