宁德市图书馆 内容
根据相关报道的文献，简单阐述蛇足石杉中石杉碱甲、乙和丙含量测定的实例[53]。
16.5.1 实验材料
实验仪器：岛津LC-20AT高效液相色谱仪、岛津AUY120型电子天平、德国BINDER电热烘箱、Milipore超纯水处理系统、KQ-250E型超声波清洗器。
实验试剂：石杉碱甲、乙、丙标准品（Sigma）为色谱纯，甲醇为色谱纯，乙酸铉、冰醋酸、酒石酸及其他试剂均为分析纯。
实验材料：采自湖南永顺县杉木河、古丈县高望界、保靖县白云山和凤凰县两头羊，经吉首大学张代贵高级实验师鉴定为蛇足石杉。
16.5.2 实验方法
16.5.2.1 样品制备
标准品混合溶液配制：精密称取石杉碱甲、乙和丙标准品100mg，分别置于100mL容量瓶中，用色谱纯级甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，质量浓度分别为100μg/mL。精密吸取上述标准品母液，分别稀释成6组浓度梯度的石杉碱甲、乙和丙混合溶液（μg/mL）:a（0.5、0.2、0.2）、b（2.0、1.0、1.0）、c（4.0、2.0、2.0）、d（6.0、4.0、3.0）、e（8.0、6.0、4.0）、f（10.0、8.0、5.0）。4℃保存。
供试品溶液制备：将采自4个样地的蛇足石杉样品清洗干净，各选取10棵具有2个二叉分支的完整植株（20～25cm），每个样地的材料等分成3份，各组间植株大小相近；同样选择15棵植株，分别收集根、茎、叶；选好的材料置于烘箱中50℃烘干，然后用研钵充分研碎，再次置于烘箱中50℃烘至恒重。精密称取0.2g粉末置于100mL具塞锥形瓶中，加入2%的酒石酸20mL，称定，超声萃取1h，再称重，用2%酒石酸补足失重。经0.45μm滤膜过滤，即得供试品溶液。
16.5.2.2 液相色谱检测
色谱条件：色谱柱为DiamonsilC18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相为甲醇-0.08mol/L乙酸铉溶液（32:68，体积比；冰醋酸调pH至5.8）；流速1mL；检测波长308nm；柱温25℃；进样量20μL。
样品检测：取供试品溶液和标准品混合溶液，按相应色谱条件进行测定，利用峰面积外标法计算石杉碱甲、乙和丙的含量。
16.5.3 结果与分析
16.5.3.1 色谱分离
在本色谱条件下，石杉碱甲、乙和丙各组分分离良好，峰形对称，无拖尾现象，不受样品中其他成分干扰，理论塔板数按石杉碱甲计不低于6000。标准品混合溶液和供试品溶液中石杉碱甲、乙和丙的保留时间分别为11.76min、6.79min和7.93min，整个过程仅需13min。
16.5.3.2 样品石杉碱含量测定
分别对4个样地的蛇足石杉全草粉末进行处理，HPLC测定，采用外标法定量:p石=A石/A标×p石，换算得供试品中石杉碱的含量。结果表明，永顺县杉木河蛇足石杉全草中石杉碱甲、乙、丙的含量分别为（0.518±0.006）‰、（0.325±0.004）‰、（0.046±0.001）‰；古丈县高望界蛇足石杉全草中石杉碱甲、乙、丙含量分别为（0.513±0.005）‰、（0.317±0.004）‰、（0.042±0.001）‰；保靖县白云山蛇足石杉全草中石杉碱甲、乙、丙含量分别为（0.504士0.006）‰、（0.312±0.003）‰、（0.040±0.001）‰；凤凰县两头羊蛇足石杉全草中石杉碱甲、乙、丙含量分别为（0.510±0.004）‰、（0.315±0.005）‰、（0.043±0.001）‰。4个样地之间的石杉碱甲、乙、丙含量无显著差异。
同理测定了不同样地三种石杉碱在蛇足石杉根、茎和叶中的分布情况，由表16-2可知，4个样地植株不同部位的石杉碱甲、乙和丙含量存在显著差异。即在蛇足石杉的叶、茎、根中，石杉碱甲和乙的分布规律一致，均为叶＞茎＞根，且叶和茎中的含量明显高于根中含量；石杉碱丙的含量则为根大于叶和茎。
16.5.1 实验材料
实验仪器：岛津LC-20AT高效液相色谱仪、岛津AUY120型电子天平、德国BINDER电热烘箱、Milipore超纯水处理系统、KQ-250E型超声波清洗器。
实验试剂：石杉碱甲、乙、丙标准品（Sigma）为色谱纯，甲醇为色谱纯，乙酸铉、冰醋酸、酒石酸及其他试剂均为分析纯。
实验材料：采自湖南永顺县杉木河、古丈县高望界、保靖县白云山和凤凰县两头羊，经吉首大学张代贵高级实验师鉴定为蛇足石杉。
16.5.2 实验方法
16.5.2.1 样品制备
标准品混合溶液配制：精密称取石杉碱甲、乙和丙标准品100mg，分别置于100mL容量瓶中，用色谱纯级甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，质量浓度分别为100μg/mL。精密吸取上述标准品母液，分别稀释成6组浓度梯度的石杉碱甲、乙和丙混合溶液（μg/mL）:a（0.5、0.2、0.2）、b（2.0、1.0、1.0）、c（4.0、2.0、2.0）、d（6.0、4.0、3.0）、e（8.0、6.0、4.0）、f（10.0、8.0、5.0）。4℃保存。
供试品溶液制备：将采自4个样地的蛇足石杉样品清洗干净，各选取10棵具有2个二叉分支的完整植株（20～25cm），每个样地的材料等分成3份，各组间植株大小相近；同样选择15棵植株，分别收集根、茎、叶；选好的材料置于烘箱中50℃烘干，然后用研钵充分研碎，再次置于烘箱中50℃烘至恒重。精密称取0.2g粉末置于100mL具塞锥形瓶中，加入2%的酒石酸20mL，称定，超声萃取1h，再称重，用2%酒石酸补足失重。经0.45μm滤膜过滤，即得供试品溶液。
16.5.2.2 液相色谱检测
色谱条件：色谱柱为DiamonsilC18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相为甲醇-0.08mol/L乙酸铉溶液（32:68，体积比；冰醋酸调pH至5.8）；流速1mL；检测波长308nm；柱温25℃；进样量20μL。
样品检测：取供试品溶液和标准品混合溶液，按相应色谱条件进行测定，利用峰面积外标法计算石杉碱甲、乙和丙的含量。
16.5.3 结果与分析
16.5.3.1 色谱分离
在本色谱条件下，石杉碱甲、乙和丙各组分分离良好，峰形对称，无拖尾现象，不受样品中其他成分干扰，理论塔板数按石杉碱甲计不低于6000。标准品混合溶液和供试品溶液中石杉碱甲、乙和丙的保留时间分别为11.76min、6.79min和7.93min，整个过程仅需13min。
16.5.3.2 样品石杉碱含量测定
分别对4个样地的蛇足石杉全草粉末进行处理，HPLC测定，采用外标法定量:p石=A石/A标×p石，换算得供试品中石杉碱的含量。结果表明，永顺县杉木河蛇足石杉全草中石杉碱甲、乙、丙的含量分别为（0.518±0.006）‰、（0.325±0.004）‰、（0.046±0.001）‰；古丈县高望界蛇足石杉全草中石杉碱甲、乙、丙含量分别为（0.513±0.005）‰、（0.317±0.004）‰、（0.042±0.001）‰；保靖县白云山蛇足石杉全草中石杉碱甲、乙、丙含量分别为（0.504士0.006）‰、（0.312±0.003）‰、（0.040±0.001）‰；凤凰县两头羊蛇足石杉全草中石杉碱甲、乙、丙含量分别为（0.510±0.004）‰、（0.315±0.005）‰、（0.043±0.001）‰。4个样地之间的石杉碱甲、乙、丙含量无显著差异。
同理测定了不同样地三种石杉碱在蛇足石杉根、茎和叶中的分布情况，由表16-2可知，4个样地植株不同部位的石杉碱甲、乙和丙含量存在显著差异。即在蛇足石杉的叶、茎、根中，石杉碱甲和乙的分布规律一致，均为叶＞茎＞根，且叶和茎中的含量明显高于根中含量；石杉碱丙的含量则为根大于叶和茎。
