宁德市图书馆 9.6.2.2 坚七扭的含量测定
| 内容出处： | 《整合畲药学研究》 图书 |
| 唯一号： | 130920020230004211 |
| 颗粒名称： | 9.6.2.2 坚七扭的含量测定 |
| 分类号： | R298.3 |
| 页数： | 2 |
| 页码： | 201-202 |
| 摘要： | 本文主要内容是关于使用HPLC-DAD方法测定檵木根中没食子酸的含量。研究选择了216nm作为检测波长，并确定了甲醇-0.3%磷酸溶液（2:98）作为流动相。样品的提取使用了5%盐酸溶液水浴中水解4小时的方法。实验使用Agilent 1260高效液相色谱仪和G4212B二极管阵列检测器等仪器，甲醇和盐酸为试剂。通过对照品溶液和供试品溶液的制备，确定了对照品和样品的浓度。最后，通过系统适应性实验，验证了测定条件的有效性和分离效果的良好性能。该研究方法可用于测定檵木根中没食子酸的含量。 |
| 关键词： | 中医药 坚七扭 含量测定 |
内容
现代临床研究表明，坚七扭的主要化学成分为没食子酸，没食子酸具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤等作用。这与畲药的理论与应用相吻合。故选用没食子酸为檵木根的指标性成分测定其含量（表9-2）。
检测波长的选择：取没食子酸对照品的溶液，用HPLC-DAD检测，在波长200～400nm范围扫描，经DAD光谱分析，结果以216nm波长处的吸收度值和峰形为优，故选用216nm作为检测波长。
流动相的确定：比较了甲醇-0.1%磷酸（10:90，体积比）、甲醇-0.4%磷酸（3：97）、甲醇-0.3%磷酸（2:98）等三种流动相，结果以甲醇-0.3%磷酸（2:98）分析效果较优，故选用此作为流动相。
样品的提取：对提取溶剂、提取方法分别做了考察，以没食子酸的得率作为指标，结果是5%盐酸水浴中水解提取〉用水煎煮提取＞30%甲醇加热回流提取＞30%甲醇超声提取。考察盐酸的酸度（2%、5%、10%）和提取的时间（2h、3h、4h）对测定结果的影响，结果发现以5%盐酸溶液提取效果最优，水浴中水解4h，提取完全。因此，本实验选用5%盐酸溶液水浴中水解4h为样品的提取方法。
1）仪器与试药
Agilent1260高效液相色谱仪（美国安捷伦科技有限公司）；G4212B二极管阵列检测器（美国安捷伦科技有限公司）；电子天平（XS105DU，瑞士梅特勒公司）；水浴锅（HH-4，上海梅香仪器公司）。
甲醇为色谱纯（Merck），盐酸、磷酸为分析纯，水为娃哈哈纯净水。没食子酸对照品（批号：110831-201204，含量89.9%，使用前无需处理），购自中国药品生物制品检定所。
2）色谱条件
色谱柱：AgilentSB-C18色谱柱（4.6mm×250mm，5uym）（美国安捷伦科技有限公司）；流动相：甲醇-0.3%磷酸溶液（2:98），流速1.0mL/min；柱温：30℃；检测波长：216nm；自动进样，进样量：5μL。
3）对照品溶液的制备
精密称取没食子酸对照品适量，用50%甲醇稀释成每1mL含没食子酸30μg的对照品溶液。
4）供试品溶液的制备
药材粉碎，过二号筛，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入5%盐酸溶液50mL，密塞，称定质量，水浴中加热水解4h，放冷至室温，再称定质量，用5%盐酸溶液补足减失的质量，摇匀，过滤，精密量取续滤液5mL置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45um微孔滤膜过滤，取续滤液，即可。
5）系统适应性实验
分别精密吸取“3）、4）”项下溶液，按“2）”项下色谱条件进样，记录色谱图，见图9-8。由图可见，在该色谱条件下，没食子酸与其他成分可达到基线分离，分离度大于1.5，理论塔板数在8000以上，分离效果较好。
检测波长的选择：取没食子酸对照品的溶液，用HPLC-DAD检测，在波长200～400nm范围扫描，经DAD光谱分析，结果以216nm波长处的吸收度值和峰形为优，故选用216nm作为检测波长。
流动相的确定：比较了甲醇-0.1%磷酸（10:90，体积比）、甲醇-0.4%磷酸（3：97）、甲醇-0.3%磷酸（2:98）等三种流动相，结果以甲醇-0.3%磷酸（2:98）分析效果较优，故选用此作为流动相。
样品的提取：对提取溶剂、提取方法分别做了考察，以没食子酸的得率作为指标，结果是5%盐酸水浴中水解提取〉用水煎煮提取＞30%甲醇加热回流提取＞30%甲醇超声提取。考察盐酸的酸度（2%、5%、10%）和提取的时间（2h、3h、4h）对测定结果的影响，结果发现以5%盐酸溶液提取效果最优，水浴中水解4h，提取完全。因此，本实验选用5%盐酸溶液水浴中水解4h为样品的提取方法。
1）仪器与试药
Agilent1260高效液相色谱仪（美国安捷伦科技有限公司）；G4212B二极管阵列检测器（美国安捷伦科技有限公司）；电子天平（XS105DU，瑞士梅特勒公司）；水浴锅（HH-4，上海梅香仪器公司）。
甲醇为色谱纯（Merck），盐酸、磷酸为分析纯，水为娃哈哈纯净水。没食子酸对照品（批号：110831-201204，含量89.9%，使用前无需处理），购自中国药品生物制品检定所。
2）色谱条件
色谱柱：AgilentSB-C18色谱柱（4.6mm×250mm，5uym）（美国安捷伦科技有限公司）；流动相：甲醇-0.3%磷酸溶液（2:98），流速1.0mL/min；柱温：30℃；检测波长：216nm；自动进样，进样量：5μL。
3）对照品溶液的制备
精密称取没食子酸对照品适量，用50%甲醇稀释成每1mL含没食子酸30μg的对照品溶液。
4）供试品溶液的制备
药材粉碎，过二号筛，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入5%盐酸溶液50mL，密塞，称定质量，水浴中加热水解4h，放冷至室温，再称定质量，用5%盐酸溶液补足减失的质量，摇匀，过滤，精密量取续滤液5mL置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45um微孔滤膜过滤，取续滤液，即可。
5）系统适应性实验
分别精密吸取“3）、4）”项下溶液，按“2）”项下色谱条件进样，记录色谱图，见图9-8。由图可见，在该色谱条件下，没食子酸与其他成分可达到基线分离，分离度大于1.5，理论塔板数在8000以上，分离效果较好。
