宁德市图书馆 内容
根据相关报道的文献，阐述红花檵木叶中黄酮类化学成分的分离与鉴定的实例[8]。
9.5.1 实验材料
红花檵木叶采集于河南信阳市潢川县卜集镇，经笔者鉴定为金缕梅科檵木属植物红花檵木，标本存放于河南中医学院。
9.5.2 化合物的提取与分离
取干燥红花檵木叶3kg，粉碎后以8倍量70%乙醇回流提取3次，每次提取1h，合并提取液减压浓缩，得浸膏310g。取浸膏300g溶解于3L蒸馏水中，加热溶解，取上清液上于D101大孔树脂柱，先用水洗脱，除去多糖类成分，再以不同浓度的乙醇（30%、50%、70%、100%）梯度洗脱，收集50%和70%乙醇洗脱部分。70%乙醇洗脱部分经硅胶柱色谱、氯仿-甲醇梯度洗脱、薄层色谱（TLC）指导合并相同馏分，再经反复SephadexLH-20凝胶色谱纯化，得到化合物A和、B。50%乙醇洗脱部分经硅胶柱色谱、氯仿-甲醇梯度洗脱、TLC指导合并相同馏分.再经反复SephadexLH-20凝胶色谱和RP-ODS色谱纯化，得到化合物C～E。
9.5.3 化合物的结构鉴定
化合物A:黄色粉末，盐酸镁粉反应呈阳性，Molish反应显阴性；UV（MeOH）Anax：367nm、266nm。ESI-MSm/z.285[M-H]；1H-NMR（6OOMHz，DMSO-d6）δ.12.47（1H，s，OH-5），8.03（2H，d，J=8.9Hz，H-2′，6′），6.92（2H，d，J=8.9Hz，H-3′，5′），6.41（1H，d，J=1.8Hz，H-8），6.17（1H，d，J=1.8Hz，H-6）；13C-NMR（DMSO-d6，150MHz）。δ：175.8（C-4），163.8（C-4′），160.6（C-8a），159.1（C-7），156.2（C-5），146.7（C-2），135.6（C-3），129.4（C-2′，6′），121.7（C-1′），115.3（C-3′，5′），103.0（C-4a），93.4（C-8），98.2（C-6），以上NMR数据与文献中山柰酚数据[21]对照一致，故确定化合物A为山柰酚。
化合物B:黄色粉末，盐酸镁粉反应呈阳性，Molish反应显阴性；UV（MeOH）Amax:370nm、55nm。ESI-MSm/z:301[M-H]-；1H-NMR（600MHz，DMSO-d6）δ：12.50（1H，s，OH-5），9.38（3H，s，OH-3，3′，4′），7.68（1H，d，J=2.0Hz，H-2′），7.54（1H，dd，J=2.0Hz，8.4Hz，H-6′）.6.88（1H，d，J=8.4Hz，H-5′）.6.40（1H.d，J=1.8Hz，H-8），6.18（1H，d，J=1.8Hz，H-6）。以上NMR数据与文献中槲皮素数据[22]对照一致，故确定化合物B为槲皮素。
化合物C:淡黄色粉末，盐酸镁粉反应呈阳性，Molish反应显阴性；UV（MeOH）max373nm、254nm。ESI-MSm/z：317[M-H]。1H-NMR（DMSO-d6600MHz）δ:12.50（1H，s，OH-5），6.18（1H，d，J=1.9Hz，H-6），6.37（1H，d，J=1.9Hz，H-8），7.24（2H，s，H-2′，6′）；13C-NMR（DMSO-d6，150MHz）δ146.9（C-2），l35.9（C-3），175.8（C-4），160.8（C-5），98.3（C-6），163.9（C-7），93.3（C-8），156.2（C-8a），102.9（C-4a），120.8（C-l′），107.2（C-2′，6′），145.8（03′），135.9（C-4′），145.8（C-5′）。以上NMR数据与文献中杨梅素数据[23]对照基本一致，故确定化合物C为杨梅素。
化合物D:淡黄色粉末，盐酸镁粉反应呈阳性，Molish反应显阳性；UV（MeOH）zmax:256nm、358nm。ES1-MSm/z：453[M-H]-，1H-NMR（DMSO-d6，600MHz）δ:12.48（1H，s，OH-5），6.89（2H，s，H-2′，6′），6.36（1H，d，J=1.8Hz，H-8），6.19（1H，d，J=1.9Hz，H-6），5.20（1H，s，H-l″），0.84（3H，d，J=6.2Hz，CH3）。以上NMR数据与文献中杨梅素-3-0-a-L-鼠李糖苷数据[24]基本一致，故确定化合物D为杨梅素-3-0-a-L-鼠李糖苷。
化合物E:淡黄色粉末，盐酸镁粉反应呈阳性，Molish反应显阳性；UV（MeOH）max：258nm、356nm。ESI-MSm/z:463[M-H]。1H-NMR（6OOMHz，DMSO-义位7.58（1H，dd，J=2.2Hz，9.0Hz，H-6'），7.57（1H，d，J=2.2Hz，H-2'），6.84（1H，d，•/=9.0Hz，H-5'），6.40（1H，d，J=
2.1Hz，H-8），6.19（1H，d，J=2.1Hz，H-6），5.47（1H，d，J=7.3Hz，H-l"），3.08～3.58（6H，m）；13C-NMR（600MHz，DMSO-/）£156.9（C-2），134.0（C-3），178.1（C-4），161.9（C-5），99.4（C-6），164.7（C-7），94.1（C-8），156.9（C-9），1O4.7（C-10），122.2（C-1′），115.9（C-2′），145.5（C-3′）.148.9（C-4′），116.8（C-5′），121.9（C-6′），101.6（C-l″），74.8（C-2″），77.2（C-3″），70.6（C-4″），78.1（C-5"），61.7（C-6"）。以上NMR数据与文献中异槲皮苷数据[25]对照一致，故确定化合物E为异槲皮苷。
9.5.4 讨论
综上，从红花檵木叶乙醇提取物中分离得到5个黄酮类化合物，采用波谱技术进行结构鉴定，分别为山奈酚、檵皮素、杨梅素、杨梅素-3-O-a-L-鼠李糖昔和异槲皮苷，所有化合物均为首次从该植物中分离得到。红花檵木中主要的活性物质为多酚类、鞣质类和香豆素类化合物[15]，黄酮是一类具有广泛药理活性的多酚化合物，包括抗氧化、抗炎、抗诱变、抗肿瘤形成与生长等多种药理活性[26，27]。大孔树脂对黄酮类成分具有很好的分离富集作用，广泛应用于黄酮类成分的分离纯化中[28]，故前期采用大孔树脂柱来进行分离。本实验结果可为红花檵木的进一步开发利用提供科学依据。
9.5.1 实验材料
红花檵木叶采集于河南信阳市潢川县卜集镇，经笔者鉴定为金缕梅科檵木属植物红花檵木，标本存放于河南中医学院。
9.5.2 化合物的提取与分离
取干燥红花檵木叶3kg，粉碎后以8倍量70%乙醇回流提取3次，每次提取1h，合并提取液减压浓缩，得浸膏310g。取浸膏300g溶解于3L蒸馏水中，加热溶解，取上清液上于D101大孔树脂柱，先用水洗脱，除去多糖类成分，再以不同浓度的乙醇（30%、50%、70%、100%）梯度洗脱，收集50%和70%乙醇洗脱部分。70%乙醇洗脱部分经硅胶柱色谱、氯仿-甲醇梯度洗脱、薄层色谱（TLC）指导合并相同馏分，再经反复SephadexLH-20凝胶色谱纯化，得到化合物A和、B。50%乙醇洗脱部分经硅胶柱色谱、氯仿-甲醇梯度洗脱、TLC指导合并相同馏分.再经反复SephadexLH-20凝胶色谱和RP-ODS色谱纯化，得到化合物C～E。
9.5.3 化合物的结构鉴定
化合物A:黄色粉末，盐酸镁粉反应呈阳性，Molish反应显阴性；UV（MeOH）Anax：367nm、266nm。ESI-MSm/z.285[M-H]；1H-NMR（6OOMHz，DMSO-d6）δ.12.47（1H，s，OH-5），8.03（2H，d，J=8.9Hz，H-2′，6′），6.92（2H，d，J=8.9Hz，H-3′，5′），6.41（1H，d，J=1.8Hz，H-8），6.17（1H，d，J=1.8Hz，H-6）；13C-NMR（DMSO-d6，150MHz）。δ：175.8（C-4），163.8（C-4′），160.6（C-8a），159.1（C-7），156.2（C-5），146.7（C-2），135.6（C-3），129.4（C-2′，6′），121.7（C-1′），115.3（C-3′，5′），103.0（C-4a），93.4（C-8），98.2（C-6），以上NMR数据与文献中山柰酚数据[21]对照一致，故确定化合物A为山柰酚。
化合物B:黄色粉末，盐酸镁粉反应呈阳性，Molish反应显阴性；UV（MeOH）Amax:370nm、55nm。ESI-MSm/z:301[M-H]-；1H-NMR（600MHz，DMSO-d6）δ：12.50（1H，s，OH-5），9.38（3H，s，OH-3，3′，4′），7.68（1H，d，J=2.0Hz，H-2′），7.54（1H，dd，J=2.0Hz，8.4Hz，H-6′）.6.88（1H，d，J=8.4Hz，H-5′）.6.40（1H.d，J=1.8Hz，H-8），6.18（1H，d，J=1.8Hz，H-6）。以上NMR数据与文献中槲皮素数据[22]对照一致，故确定化合物B为槲皮素。
化合物C:淡黄色粉末，盐酸镁粉反应呈阳性，Molish反应显阴性；UV（MeOH）max373nm、254nm。ESI-MSm/z：317[M-H]。1H-NMR（DMSO-d6600MHz）δ:12.50（1H，s，OH-5），6.18（1H，d，J=1.9Hz，H-6），6.37（1H，d，J=1.9Hz，H-8），7.24（2H，s，H-2′，6′）；13C-NMR（DMSO-d6，150MHz）δ146.9（C-2），l35.9（C-3），175.8（C-4），160.8（C-5），98.3（C-6），163.9（C-7），93.3（C-8），156.2（C-8a），102.9（C-4a），120.8（C-l′），107.2（C-2′，6′），145.8（03′），135.9（C-4′），145.8（C-5′）。以上NMR数据与文献中杨梅素数据[23]对照基本一致，故确定化合物C为杨梅素。
化合物D:淡黄色粉末，盐酸镁粉反应呈阳性，Molish反应显阳性；UV（MeOH）zmax:256nm、358nm。ES1-MSm/z：453[M-H]-，1H-NMR（DMSO-d6，600MHz）δ:12.48（1H，s，OH-5），6.89（2H，s，H-2′，6′），6.36（1H，d，J=1.8Hz，H-8），6.19（1H，d，J=1.9Hz，H-6），5.20（1H，s，H-l″），0.84（3H，d，J=6.2Hz，CH3）。以上NMR数据与文献中杨梅素-3-0-a-L-鼠李糖苷数据[24]基本一致，故确定化合物D为杨梅素-3-0-a-L-鼠李糖苷。
化合物E:淡黄色粉末，盐酸镁粉反应呈阳性，Molish反应显阳性；UV（MeOH）max：258nm、356nm。ESI-MSm/z:463[M-H]。1H-NMR（6OOMHz，DMSO-义位7.58（1H，dd，J=2.2Hz，9.0Hz，H-6'），7.57（1H，d，J=2.2Hz，H-2'），6.84（1H，d，•/=9.0Hz，H-5'），6.40（1H，d，J=
2.1Hz，H-8），6.19（1H，d，J=2.1Hz，H-6），5.47（1H，d，J=7.3Hz，H-l"），3.08～3.58（6H，m）；13C-NMR（600MHz，DMSO-/）£156.9（C-2），134.0（C-3），178.1（C-4），161.9（C-5），99.4（C-6），164.7（C-7），94.1（C-8），156.9（C-9），1O4.7（C-10），122.2（C-1′），115.9（C-2′），145.5（C-3′）.148.9（C-4′），116.8（C-5′），121.9（C-6′），101.6（C-l″），74.8（C-2″），77.2（C-3″），70.6（C-4″），78.1（C-5"），61.7（C-6"）。以上NMR数据与文献中异槲皮苷数据[25]对照一致，故确定化合物E为异槲皮苷。
9.5.4 讨论
综上，从红花檵木叶乙醇提取物中分离得到5个黄酮类化合物，采用波谱技术进行结构鉴定，分别为山奈酚、檵皮素、杨梅素、杨梅素-3-O-a-L-鼠李糖昔和异槲皮苷，所有化合物均为首次从该植物中分离得到。红花檵木中主要的活性物质为多酚类、鞣质类和香豆素类化合物[15]，黄酮是一类具有广泛药理活性的多酚化合物，包括抗氧化、抗炎、抗诱变、抗肿瘤形成与生长等多种药理活性[26，27]。大孔树脂对黄酮类成分具有很好的分离富集作用，广泛应用于黄酮类成分的分离纯化中[28]，故前期采用大孔树脂柱来进行分离。本实验结果可为红花檵木的进一步开发利用提供科学依据。
