宁德市图书馆 6.6 炮制和质量标准
内容
6.6.1 山里黄根的炮制
取原药，除去杂质，洗净，润透，切厚片（细小者切小段），干燥。
6.6.2 山里黄根的质量标准
经研究表明，可通过鉴别（粉末显微特征、薄层色谱）、检查（水分、灰分）、浸出物、含量测定（高效液相色谱）对山里黄根的质量进行全面的控制。
6.6.2.1 山里黄根的检查
1）山里黄根的水分
水分按《中国药典》水分测定法中的烘干法检查。根据测定结果（表6-1），将水分限度定为不得过12.0%。
2）山里黄根的总灰分
总灰分按《中国药典》灰分测定法中的总灰分测定法检查。根据测定结果（表6-1），将总灰分限度定为不得过4.0%。
3）山里黄根的浸出物
浸出物按《中国药典》醇溶性浸出物测定法项下的热浸法检查。根据测定结果（表6-1），用50%乙醇作溶剂，将浸出物的限度定为应不得少于8.0%。
66.2.2 山里黄根的含量测定
《湖南省中药材标准》（2009年版）中选取齐墩果酸为质控指标，利用水解的方法将其中的齐墩果酸酯转换成齐墩果酸，测定其含量。现有的研究表明竹节参皂苷Ⅳa是山里黄根主要化学成分之一，皂苷在镇痛、镇静、抗炎、增强免疫力、抗肿瘤等诸多方面表现出生理活性，这与畲药的理论与应用相吻合。而齐墩果酸在多数药材中大量存在，特征性不强，故选取原型存在且更加能反应山里黄根药物性质与质量情况的竹节参皂苷IVa为指标性成分测定其含量。在珠子参的基础上，考察了乙腈与不同浓度的磷酸溶液不同配比的流动相，结果发现以乙腈-0.1%磷酸溶液（33：67）的分析效果较优，分离度较高，故选此作为流动相。分别考察了提取溶剂甲醇、乙醇的浓度（45%甲醇、60%甲醇、纯甲醇、45%乙醇、60%乙醇、纯乙醇）、用量（20mL、25mL、30mL、40mL）以及超声时间对测定结果的影响，结果发现60%乙醇25mL提取效果最优，超声40min时，提取完全。因此，本实验选用25mL60%乙醇超声处理40min为样品的提取方法。
1）仪器与试药
仪器Agilent1260高效液相色谱仪（美国安捷伦科技有限公司）；DAD检测器；AgilentZorbaxSB-C18（4.6mm×250mm，5um）（美国安捷伦科技有限公司）；电子天平（XS105DU，瑞士梅特勒公司）；智能超声波清洗器（DL-360D，上海之信仪器有限公司）。
甲醇、乙腊为色谱纯（Merck），磷酸为色谱纯（科密欧），水为娃哈哈纯净水。
竹节参皂苷Ⅳa对照品（批号：111861-201001，含量81.2%，使用前无需干燥），购自中国药品生物制品检定所。
2）色谱条件
流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（33:67），流速为1.0mL/min；柱温30℃；检测波长为203nm；进样量均为10μL。
3）对照品溶液的制备
精密称取竹节参皂昔Ⅳa对照品适量，加60%乙醇制成252.2μg/mL的溶液，作为储备液。精密吸取储备液制成50.44μg/mL的溶液，作为对照品溶液。
4）供试品溶液的制备
取山里黄根过二号筛粉末约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇25mL，密塞，称定质量，超声处理40min，放冷至室温，再称定质量，用60%乙醇补足减失的质量，摇匀，用0.45um的微孔滤膜过滤，滤液即为供试品溶液。
5）系统适用性实验
分别精密吸取“3）、4）”项下溶液，按“2）”项下色谱条件进样，记录色谱图，见图6-4。由图6-4可见，在该色谱条件下，竹节参皂苷Ⅳa与其他成分可达到基线分离，分离度大于1.5，理论塔板数均在10000以上，具有良好的分离效果。
取原药，除去杂质，洗净，润透，切厚片（细小者切小段），干燥。
6.6.2 山里黄根的质量标准
经研究表明，可通过鉴别（粉末显微特征、薄层色谱）、检查（水分、灰分）、浸出物、含量测定（高效液相色谱）对山里黄根的质量进行全面的控制。
6.6.2.1 山里黄根的检查
1）山里黄根的水分
水分按《中国药典》水分测定法中的烘干法检查。根据测定结果（表6-1），将水分限度定为不得过12.0%。
2）山里黄根的总灰分
总灰分按《中国药典》灰分测定法中的总灰分测定法检查。根据测定结果（表6-1），将总灰分限度定为不得过4.0%。
3）山里黄根的浸出物
浸出物按《中国药典》醇溶性浸出物测定法项下的热浸法检查。根据测定结果（表6-1），用50%乙醇作溶剂，将浸出物的限度定为应不得少于8.0%。
66.2.2 山里黄根的含量测定
《湖南省中药材标准》（2009年版）中选取齐墩果酸为质控指标，利用水解的方法将其中的齐墩果酸酯转换成齐墩果酸，测定其含量。现有的研究表明竹节参皂苷Ⅳa是山里黄根主要化学成分之一，皂苷在镇痛、镇静、抗炎、增强免疫力、抗肿瘤等诸多方面表现出生理活性，这与畲药的理论与应用相吻合。而齐墩果酸在多数药材中大量存在，特征性不强，故选取原型存在且更加能反应山里黄根药物性质与质量情况的竹节参皂苷IVa为指标性成分测定其含量。在珠子参的基础上，考察了乙腈与不同浓度的磷酸溶液不同配比的流动相，结果发现以乙腈-0.1%磷酸溶液（33：67）的分析效果较优，分离度较高，故选此作为流动相。分别考察了提取溶剂甲醇、乙醇的浓度（45%甲醇、60%甲醇、纯甲醇、45%乙醇、60%乙醇、纯乙醇）、用量（20mL、25mL、30mL、40mL）以及超声时间对测定结果的影响，结果发现60%乙醇25mL提取效果最优，超声40min时，提取完全。因此，本实验选用25mL60%乙醇超声处理40min为样品的提取方法。
1）仪器与试药
仪器Agilent1260高效液相色谱仪（美国安捷伦科技有限公司）；DAD检测器；AgilentZorbaxSB-C18（4.6mm×250mm，5um）（美国安捷伦科技有限公司）；电子天平（XS105DU，瑞士梅特勒公司）；智能超声波清洗器（DL-360D，上海之信仪器有限公司）。
甲醇、乙腊为色谱纯（Merck），磷酸为色谱纯（科密欧），水为娃哈哈纯净水。
竹节参皂苷Ⅳa对照品（批号：111861-201001，含量81.2%，使用前无需干燥），购自中国药品生物制品检定所。
2）色谱条件
流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（33:67），流速为1.0mL/min；柱温30℃；检测波长为203nm；进样量均为10μL。
3）对照品溶液的制备
精密称取竹节参皂昔Ⅳa对照品适量，加60%乙醇制成252.2μg/mL的溶液，作为储备液。精密吸取储备液制成50.44μg/mL的溶液，作为对照品溶液。
4）供试品溶液的制备
取山里黄根过二号筛粉末约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇25mL，密塞，称定质量，超声处理40min，放冷至室温，再称定质量，用60%乙醇补足减失的质量，摇匀，用0.45um的微孔滤膜过滤，滤液即为供试品溶液。
5）系统适用性实验
分别精密吸取“3）、4）”项下溶液，按“2）”项下色谱条件进样，记录色谱图，见图6-4。由图6-4可见，在该色谱条件下，竹节参皂苷Ⅳa与其他成分可达到基线分离，分离度大于1.5，理论塔板数均在10000以上，具有良好的分离效果。
