宁德市图书馆 内容
1）细胞培养与样品溶液配制
a.细胞培养
将肝癌细胞株BEL-7404培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基中，置于37℃、5%CO2饱和湿度的细胞培养箱中培养，每隔48h更换新鲜培养基。每隔2～3天使用含EDTA的0.25%胰蛋白酶消化传代。实验中选取处于对数生长期的细胞用于实验。
b.样品溶液配制
将毛花猕猴桃根氯仿层冻干粉末溶于DMSO配制成40mg/mL的母液，12000r/min，10min离心，取上清液，过滤除菌后分装待用。
2）毛花猕猴桃根氯仿层对肝癌细胞BEL-7404生长的影响
取对数生长期的BEL-7404接种于96孔板内，每孔加入190μL细胞液，调整细胞密度，使每孔种入3000个细胞。接种后培养8h，待细胞贴壁后，使用培养基将药物配制成不同浓度，每孔加入10μL药物，使其终质量浓度分别为112.5μg/mL，87.5μg/mL，62.5μg/mL，每组设置3个复孔，同时设置终浓度为0.5%DMSO溶剂对照组和终质量浓度分别为3.325μg/mL，0.3325μg/mL，0.03325μg/mL的紫杉醇阳性对照组。自加入化合物Oh、24h、48h、72h、120h、144h，使用胰蛋白酶消化，收集细胞，加入台盼蓝排除死细胞，对每组分别进行计数，所得数据绘制生长曲线（图5-9、图5-10）。
3）毛花猕猴桃根氯仿层对肝癌细胞BEL-7404和正常细胞LO2增殖抑制作用
取对数生长期的BEL-7404、LO2细胞接种于96孔板内，每孔加入190μL细胞液，调整细胞密度，使每孔种入3000个细胞。接种后培养8h，待细胞贴壁后，使用培养基将药物配制成不同浓度，每孔加入10μL药物，使其终质量浓度分别为200μg/mL，175μg/mL，150μg/mL，137.5μg/mL，125μg/mL，112.5μg/mL，100μg/mL，87.5μg/mL，每组设置3个复孔，同时设置终浓度为0.5%DMSO溶剂对照组和终质量浓度分别为3.325μg/mL，1.663|μg/mL，3.325×10-1μg/mL，1.663×10-1|μg/mL，3.325×10-2μg/mL，1.663×10-2μg/mL的紫杉醇阳性对照组。将加药后的96孔板放回培养箱中继续培养72h，取出培养板，每孔加入新鲜配制的0.5mg/mLMTT10μL，继续培养4h，取出培养板，离心3000r/min，10min，吸弃上清液，每孔加入150μLDMSO，于摇床上摇动10min，充分溶解所形成的甲瓒，用酶标仪在490nm处测定各孔吸光度（A），计算样品对细胞生长的抑制率，并计算IC50值。实验重复3次。使用下列公式计算抑制率：
抑制率%=对照组吸光度A均值-实验组吸光度A均值/对照组吸光度A均值-凋零组吸光度A均值×100%
在所设定的87.5～20μg/mL给药浓度范围内，毛花猕猴桃根氯仿层对肝癌细胞株BEL-7404有显著的增殖抑制作用，结果如表5-2所示，由表中数据可知，随着给药浓度的增高，氯仿层对BEL-7404的抑制率越高，可见氯仿层对BEL-7404的抑制作用呈剂量依赖性关系。在200μg/mL给药浓度下作用72h抑制率达到85%以上，半抑制浓度IC50约为114.8日μg/mL。阳性对照药紫杉醇组呈现相似的抑制规律，其半抑制浓度IC50约为6.999×10-1μg/mL。
结果如表5-2所示，在112.5～200μg/mL浓度范围内，毛花猕猴桃根氯仿层对人正常肝细胞LO2有显著的增殖抑制作用，随着给药浓度的增高，氯仿层对LO2的抑制率越高；当浓度下降到100μg/mL以下时，毛花猕猴桃根氯仿层对人正常肝细胞LO2的增殖抑制作用不再明显。同时，由表中数据可知，当给药浓度低于150μg/mL时，毛花猕猴桃根氯仿层对人正常肝细胞LO2的增殖抑制作用要明显小于对肝癌细胞株BEL-7404的增殖抑制作用。计算所得毛花猕猴桃根氯仿层对人正常肝细胞LO2的半抑制浓度IC50约为132.2μg/mL。紫杉醇组除最大浓度组外，其他各组对LO2的抑制作用不明显。
a.细胞培养
将肝癌细胞株BEL-7404培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基中，置于37℃、5%CO2饱和湿度的细胞培养箱中培养，每隔48h更换新鲜培养基。每隔2～3天使用含EDTA的0.25%胰蛋白酶消化传代。实验中选取处于对数生长期的细胞用于实验。
b.样品溶液配制
将毛花猕猴桃根氯仿层冻干粉末溶于DMSO配制成40mg/mL的母液，12000r/min，10min离心，取上清液，过滤除菌后分装待用。
2）毛花猕猴桃根氯仿层对肝癌细胞BEL-7404生长的影响
取对数生长期的BEL-7404接种于96孔板内，每孔加入190μL细胞液，调整细胞密度，使每孔种入3000个细胞。接种后培养8h，待细胞贴壁后，使用培养基将药物配制成不同浓度，每孔加入10μL药物，使其终质量浓度分别为112.5μg/mL，87.5μg/mL，62.5μg/mL，每组设置3个复孔，同时设置终浓度为0.5%DMSO溶剂对照组和终质量浓度分别为3.325μg/mL，0.3325μg/mL，0.03325μg/mL的紫杉醇阳性对照组。自加入化合物Oh、24h、48h、72h、120h、144h，使用胰蛋白酶消化，收集细胞，加入台盼蓝排除死细胞，对每组分别进行计数，所得数据绘制生长曲线（图5-9、图5-10）。
3）毛花猕猴桃根氯仿层对肝癌细胞BEL-7404和正常细胞LO2增殖抑制作用
取对数生长期的BEL-7404、LO2细胞接种于96孔板内，每孔加入190μL细胞液，调整细胞密度，使每孔种入3000个细胞。接种后培养8h，待细胞贴壁后，使用培养基将药物配制成不同浓度，每孔加入10μL药物，使其终质量浓度分别为200μg/mL，175μg/mL，150μg/mL，137.5μg/mL，125μg/mL，112.5μg/mL，100μg/mL，87.5μg/mL，每组设置3个复孔，同时设置终浓度为0.5%DMSO溶剂对照组和终质量浓度分别为3.325μg/mL，1.663|μg/mL，3.325×10-1μg/mL，1.663×10-1|μg/mL，3.325×10-2μg/mL，1.663×10-2μg/mL的紫杉醇阳性对照组。将加药后的96孔板放回培养箱中继续培养72h，取出培养板，每孔加入新鲜配制的0.5mg/mLMTT10μL，继续培养4h，取出培养板，离心3000r/min，10min，吸弃上清液，每孔加入150μLDMSO，于摇床上摇动10min，充分溶解所形成的甲瓒，用酶标仪在490nm处测定各孔吸光度（A），计算样品对细胞生长的抑制率，并计算IC50值。实验重复3次。使用下列公式计算抑制率：
抑制率%=对照组吸光度A均值-实验组吸光度A均值/对照组吸光度A均值-凋零组吸光度A均值×100%
在所设定的87.5～20μg/mL给药浓度范围内，毛花猕猴桃根氯仿层对肝癌细胞株BEL-7404有显著的增殖抑制作用，结果如表5-2所示，由表中数据可知，随着给药浓度的增高，氯仿层对BEL-7404的抑制率越高，可见氯仿层对BEL-7404的抑制作用呈剂量依赖性关系。在200μg/mL给药浓度下作用72h抑制率达到85%以上，半抑制浓度IC50约为114.8日μg/mL。阳性对照药紫杉醇组呈现相似的抑制规律，其半抑制浓度IC50约为6.999×10-1μg/mL。
结果如表5-2所示，在112.5～200μg/mL浓度范围内，毛花猕猴桃根氯仿层对人正常肝细胞LO2有显著的增殖抑制作用，随着给药浓度的增高，氯仿层对LO2的抑制率越高；当浓度下降到100μg/mL以下时，毛花猕猴桃根氯仿层对人正常肝细胞LO2的增殖抑制作用不再明显。同时，由表中数据可知，当给药浓度低于150μg/mL时，毛花猕猴桃根氯仿层对人正常肝细胞LO2的增殖抑制作用要明显小于对肝癌细胞株BEL-7404的增殖抑制作用。计算所得毛花猕猴桃根氯仿层对人正常肝细胞LO2的半抑制浓度IC50约为132.2μg/mL。紫杉醇组除最大浓度组外，其他各组对LO2的抑制作用不明显。
