宁德市图书馆 内容
5.1 植物资源
白山毛桃根，即猕猴桃科（Actinidiaceae）猕猴桃属植物毛花猕猴（ActinidiaerianthaBenth.）的干燥根，以畲族习用药材名义收载于2015年版《浙江省中药炮制规范》[1]。毛花猕猴桃又名毛花杨桃、白藤梨、白毛桃、毛阳桃、毛冬瓜等。
5.1.1 猕猴桃属植物概述
猕猴桃属（ActinidiaLindl）植物是，猕猴桃科一类落叶、半落叶至常绿藤本，共有54种以上，我国有52种以上[2]。其中，中华猕猴桃、美味，猕猴桃、毛花猕猴桃和少量软枣猕猴桃具有较高的经济价值。该属植物自然分布较广，主要分布在亚热带地区，部分分布在温带，其中较多分布在中国、意大利、新西兰、智利、法国、希腊、日本、美国等国家。我国是该属植物的原产地和分布中心，除青海、新疆、内蒙古外，其余各省（尤其是长江流域和各省的山区阴湿地带）均有分布。
该属植物无毛或被毛，毛为简单的柔毛、茸毛、绒毛、绵毛、硬毛、刺毛或分枝的星状绒毛；髓实心或片层状。枝条通常有皮孔；冬芽隐藏于叶座之内或裸露于外。叶为单叶，互生，膜质、纸质或革质，多数具长柄，有锯齿，很少近全缘，叶脉羽状，多数侧脉间有明显的横脉，小脉网状；托叶缺或废退。花白色、红色、黄色或绿色，雌雄异株，单生或排成简单的或分歧的聚伞花序，腋生或生于短花枝下部，有苞片，小；萼片5片，间有2～4片的，分离或基部合生，覆瓦状排列，极少为镣合状排列，雄蕊多数，在雄花中的数目比雌性花的（不育雄蕊）为多，而且较长，花药黄色、褐色、紫色或黑色，丁字式着生，2室，纵裂，基部通常叉开；花盘缺；子房上位，无毛或有毛，球状、柱状或瓶状，多室，有中轴胎座，胚珠多数，倒生，花柱与心皮向数，通常外弯压成放射状；在雄花中存在退化子房。果为浆果，秃净，少数被毛，球形、卵形至柱状长圆形，有斑点（皮孔显著）或无斑点（皮孔几乎不可见）；种子多数，细小，扁卵形，褐色，悬浸于果瓢之中；种皮尽成网状洼点；胚乳肉质，丰富；胚长约为种子一半，圆柱状，直，位于胚乳的中央；子叶短；胚根靠近种脐[1]。
该属植物果实可食；叶可饲猪；枝条浸出液含胶质可供造纸业作调浆剂，并可用于建筑方面与水泥、石灰、黄泥、沙子等混合使用，可起加固作用，用以铺筑路面、晒坪和涂封瓦檐屋脊；根部可作杀虫农药；花是很好的蜜源；许多种类的枝、叶、花、果都十分美观，又适宜栽植于绿化园地作观赏植物。
猕猴桃属植物原产于我国，有悠久的栽培利用历史。早在《诗经•桧风》中《隰有苌楚》便有诗句“隰有苌楚，猗傩其枝”，其中“苌楚”即为猕猴桃，记述河南密县一带有种植猕猴桃。《尔雅•释草》中将“长楚”释为“铫芅”，东晋著名学者郭璞将其注为“羊桃”，《医心方》中也作“羊桃”，现在湖北和四川东部一些地方的百姓仍称之为“羊桃”。唐代著名诗人岑参的诗作《太白东溪张老舍即事，寄舍弟侄等》，其中便有“中庭井阑上，一架猕猴桃”。表明当时便已经开始将猕猴桃作为观赏树种进行栽培。同时，猕猴桃也多次出现在各种医学典著中，如《食经》《食疗本草》《本草拾遗》《开宝本草》《得配本草》《湖南药物志》《闽东本草》《中华本草》《全国中草药汇编》等，具有解热、止渴、健胃、通淋等功效，主治烦热、肺热干咳、消化不良、湿热黄疸、石淋、痔疮，并附有多个配方。
5.1.2 白山毛桃根基原植物形态、鉴别与资源分布
5.1.2.1 基原植物形态
毛花猕猴桃是猕猴桃属一种珍奇的野生落叶藤本植物。幼枝及叶柄密生灰白色或灰褐色绒毛，老枝无毛。叶对生，厚纸质，矩圆形至圆形，基部圆截形至圆楔形，极少近心形，老时上面仅沿叶脉有疏毛，下面密生灰白色或灰褐色星状绒毛。花淡红色，2～3朵成聚伞花序；萼片常为2片，连同花柄密生灰白色绒毛；花瓣5～6瓣，雄蕊多数；花柱丝状，多数。果实表面密生灰白色长绒毛，果肉细嫩多汁，酸甜适宜维生素C含量高。
5.1.2.2 鉴别
1）白山毛桃根的粉末显微特征
本品粉末黄褐色。草酸钙针晶较多，长20～200um。石细胞较多，单个或数个存在，壁厚层纹明显，多呈类方形，少数呈不规则形。木栓细胞较多，多呈类长方形或多角形。导管较大，多破碎，为具缘纹孔导管。淀粉粒较多，单粒多呈圆球形，脐点点状直径2～25um；复粒由2～8个分粒组成。结果见图5-1。
2）白山毛桃根的理化鉴别
白山毛桃根粉末的理化鉴别，参考藤梨根《上海市中药材标准》（1994年版），取粉末0.2g于试管中，加2%氢氧化钠溶液5mL，振摇，取滤液（或离心，取上清液），溶液显棕红色至深红色，在此溶液中滴加5%盐酸溶液，使溶液成酸性，溶液颜色变为黄色至橙色。
5.1.2.3 资源分布
该植物主产于浙江、福建、安徽、湖北、湖南、广东、广酉、贵州等省区，生于海拔250～1000m山地上的高草灌木丛或灌木丛林中。
5.1.3 毛花猕猴桃的繁育与栽培
毛花猕猴桃长势较强，抗逆性、抗病虫害性较强，适应性广，适合在年平均温12～13℃，有效积温4500～5200℃，无霜期210～290天的地区发展。毛花猕猴桃幼苗定植后留4～5个饱满芽定干，萌发后选1～2个让其向上生长，并搭架牵引，逐步形成“1主干2主蔓”基本树形。该树种栽后第二年挂果，第三年投产。
苗木繁育：毛花猕猴桃可通过种子播种、扦插（包括硬枝扦插、嫩枝扦插和根插）、压条和嫁接等方法进行繁育。在生产实践中，应根据现有生产条件，以及对技术的掌握程度，因时因地采用适宜的繁育方式繁育高品质苗木[3]。
施肥管理：毛花猕猴桃施肥管理遵循基肥和追肥相结合的原则。秋施基肥，在树盘周围开环状施肥沟，施入有机肥、化肥，覆土，浇水。春季萌芽前追施萌芽肥，以速效肥为主；果实膨大期追施壮果肥。
整形修剪：休眠期修剪以培养幼树树形，更新成年树结果枝组为主要目的，通过短截、回缩等方式合理配置结果枝组，一般1个主蔓上留4个侧枝。生长季修剪主要通过抹芽、疏枝、摘心等方式控制徒长枝，疏除无用枝。
病虫害管理：毛花猕猴桃抗病虫能力较强，但随着人工栽培的不断规模化，病虫害也相对较多，常见的病虫害主要有：根腐病、溃疡病、褐斑病、炭疽病、灰霉病、叶蝉、东方小薪甲、蝽象及叶螨等。病虫害防治应遵循“预防为主，综合防治”的原则，物理防治与化学防治相结合，采用低毒低残留的农药，并尽量减少施药次数。
5.2 典籍记载与应用
5.2.1 畲医药典籍记载
【药材性状】根圆柱形，长短粗细不一。表面红棕色至紫褐色，凸凹不平，在弯曲处常有横向裂纹和浅陷横沟而略呈结节状。质坚韧，不易折断，断面柴性，皮部红棕色，可见白色结晶物，近皮部的木质部浅棕色，具较多白色结晶物，其他部位的木质部淡红色，导管孔明显，散生有白色结晶物。
【性味】根：味淡、微辛，性寒。叶：味微苦、微辛，性寒。
【功效】根：解毒消肿，清热利湿。叶：解毒消肿，祛瘀止痛，止血敛疮。
【主治】根：热毒痈肿，乳痈，肺热失音，湿热痢疾，淋浊，带下，风湿痹痈，胃癌，食道癌。根皮外用治跌打损伤。叶：痈疽肿毒，乳痈，跌打损伤，骨折，刀伤，冻疮溃破。
【附方】①治胃癌、肠癌：白山毛桃根50g，半枝莲25g，白花蛇舌草25g，三尖杉10g，铁丁角30g，七叶一枝花25～30g，花菇草（香菇）50g，水煎服。②治子宫脱垂：白山毛桃根250g，老虎爪根120g，猪大肠头1节。炖1h，食大肠及汤。③治疔疮：白山毛桃根皮、泡桐叶等量。共研成细粉，与酒槽混匀；用茶叶包好，放入火中炙烤，外敷⑷。
5.2.2 其他医药典籍记载和民间应用
《浙江民间常用草药》记载，毛花猗猴桃可“清热解毒，舒筋活血。治全身疮疳，皮炎，无名肿毒，腹股沟淋巴结炎，跌打损伤”，并有附方如下。①治无名肿毒：鲜毛冬瓜根捣烂或加烧酒捣烂敷患处。②治腹股沟淋巴结炎：毛冬瓜根捣烂，拌酒糟煨热外敷患处，每日1次。③治疝气：毛冬瓜根1两，荔枝2两，鸡蛋2只，加烧酒1杯，水煎。食蛋和药汁。④治全身疳肿、皮炎：毛冬瓜根4～5两，加猪肉适量同煮食。⑤治跌打损伤：毛冬瓜根皮捣烂外敷，另取根4～8两水煎服。
《福建中草药》记载，毛花，猕猴桃可“治肺热失音，大头瘟，湿热带下，石淋，白浊，乳痈，胃癌，鼻癌，乳癌”，并有附方如下。①治肺热失音：毛花杨桃鲜根1两。水煎，调冰糖服。②治湿热带下、石淋、白浊：毛花杨桃鲜根、野兰麻鲜根各1～2两。水煎服。③治大头瘟（颜面丹毒）：毛花杨桃鲜根，用第二次米泪水磨浓汁涂患处。④治乳痈：毛花杨桃鲜叶，加酒糟、红糖各少许，捣烂热敷患处。⑤治胃癌、鼻咽癌、乳癌：毛花杨桃鲜根2两5钱，水煎服，15～20天为一疗程，休息几天后再服，连服4个疗程。
《全国中草药汇编》记载，毛花猕猴桃"果：调中理气，生津润燥，解热除烦，用于消化不良，食欲不振，呕吐，烧烫伤；根、根皮：清热解毒，活血消肿，祛风利湿，用于风湿性关节炎，跌打损伤，丝虫病，肝炎，痢疾，淋巴结结核，痈疖肿毒，癌症此外，《湖南药物志》《闽东本草》《食疗本草》《开宝本草》，以及崔禹锡的《食经》等论著也对毛花猕猴桃有所记载，并有附方如下。①治食欲不振，消化不良：猕猴桃干果2两。水煎服（《湖南药物志》）。②治偏坠：猕猴桃1两，金柑根3钱。水煎去渣，冲入烧酒2两，分2次内服（《闽东本草》）。
5.3 化学成分研究
5.3.1 猕猴桃属的化学成分研究
猕猴桃属的化学成分研究较多，主要包括三萜类、黄酮类等成分。该化学成分的分布及植物来源参见表5-1。
5.3.2 毛花猕猴桃的化学成分研究
毛花猕猴桃化学成分的研究最早见于1988年黄初升[7]的研究，他以毛花猕猴桃根为材料，分离提取出6种化学成分，分别为。β-谷甾醇、胡萝卜苷、熊果酸、2a，3a，24-三羟基-12-烯-28-熊果酸、毛花猕猴桃酸A（24-乙酰氧基-2a，3a-二羟基-12-烯-28-熊果酸）、毛花猕猴桃酸B（2β，3β，23-三羟基-12-烯-28-熊果酸），其中后两种化合物为两种新的三站萜类化合物。此后，又从毛花猕猴桃根中分离出二十四碳酸、葡萄糖，以及一•个新三萜类化合物2a，3β，24-三羟基-12-烯-28-熊果酸[8]。1997年，白素平[9]又从毛花猕猴桃根中分离得到3个三萜类化合物，分别为2β3β-二羟基-23-氧代-12-烯-28-熊果酸（一种新的三萜类化合物）、2a，3β，23-三羟基-12-烯-28-熊果酸、2β，3β-二羟基-12-烯-26-熊果酸。同时，他还对毛花猕猴桃的地上部分进行研究[10]，并首次从其地上部分分离得到毛花猕猴桃酸B（2β，3β，23-三羟基-12-烯-28-熊果酸）、2a，3β，24-三羟基-12-烯-28-熊果酸、熊果酸、伊谷甾醇、β-胡萝卜苷。此外，在糖类化合物的研究中，Boldingh[11]以毛花猕猴桃的叶、根为材料，分离出半乳糖、葡萄糖和甘露聚糖，且其比例为1：2：2；Xu[l2]从毛花猕猴桃的根中分离出AEPA、AEPB、AEPC、AEPD4种多糖成分，它们均由半乳糖、阿拉伯糖和海藻糖构成，只是比例不同。
5.4 药理活性研究
白山毛桃根具有悠久的药用历史，并具有三萜类、糖类，以及类胡萝卜素、谷甾醇等多种化合物，其药理活性也被广泛研究。研究表明，白山毛桃根具有抗肿瘤、增强免疫、抗氧化等活性[13]。
5.4.1 抗肿瘤作用
王晓明等[14]使用系统溶剂法对毛花猕猴桃的根和叶的80%甲醇微波提取物进行初步分离，应用MTT比色法测定其不同溶剂的提取部位对肝癌细胞株SMMC-7721的生长抑制作用，结果表明，氯仿提取物和乙酸乙酯提取物表现出显著的抑制作用，其IC50分别为221.82μg/mL和563.64μg/mL；郑燕枝[15]以人结肠癌细胞（RKO）、肝癌细胞（HepG2）和胃癌细胞（MGC-803、SGC-7901）四种人肿瘤细胞为实验模型，采用MTT法研究了其乙醇总提物及其四个不同极性部位的抗肿瘤活性，结果表明，其抗肿瘤活性部位为乙酸乙酯部位（EE-AER），且其对胃癌细胞SGC-7901抑制活性最强；王水英等[16]研究白山毛桃根提取物对人红白血病K562细胞增殖的抑制作用及其可能的作用机制，结果表明，白山毛桃根提取物能抑制K562细胞增殖和诱导细胞凋亡；林水花等[17]用毛花猕猴桃根、茎、叶不同部位提取对胃癌细胞SGC-7901、乳腺癌细胞MCF-7、鼻咽癌细胞CNE2开展研究，结果表明，毛花猕猴桃地上各部分提取物对三种肿瘤细胞无明显的抑制作用，但其根部提取液对胃癌细胞SGC-7901和鼻咽癌细胞CNE2具有明显的抑制作用，且其乙酸乙酯部位抗肿瘤活性最强；王水英等[18]研究毛花密猴桃根对黑色素瘤M21细胞增殖的影响，结果表明，该提取物可以抑制M21细胞的增殖、侵袭迁移能力。
5.4.2 增强免疫作用
Xu等[19]研究毛花猕猴桃水溶性总糖（AEP）及纯化后的四种多糖（AEPA、AEPB、AEPC、AEPD）的抗肿瘤和免疫调剂作用，结果表明，这些多糖不仅能显著抑制小鼠移植性肿瘤的生长，还能明显促进肿瘤小鼠脾细胞增殖，提高脾细胞中IL-2和IFN-y的水平，增强自然杀伤细胞（NK）和细胞毒素T淋巴细胞（CTL）的活性。而且，他们还发现，从毛花猕猴桃根中提取的水溶性多糖具有很强的提高细胞免疫和体液免疫反应的能力，引起Thl/Th2应激反应的平衡。此外，林少琴等研究发现，毛花猕猴桃根的粗提物可以增强小鼠巨噬细胞的吞噬功能，在药物毒性剂量下，粗提物的功效与其用量成正比。
5.4.3 抗氧化活性
Du等[21]采用多种实验（DPPH、ABTS、ORAC、FRAP、SASR和MCC）对8种猕猴桃属果实的抗氧化能力进行评价，结果表明，与栽培的中华猕猴桃和美味猕猴桃相比，野生的毛花猕猴桃和阔叶猕猴桃果实具有较强的抗氧化能力，且抗氧化能力与其所含多酚类化合物和维生素c的量呈正相关。
5.5 研究实例
当前，癌症是仅次于心血管疾病的世界第二大高发疾病，严重威胁人类的健康。人们对于开发相关抗肿瘤药物进行了大量研究，而毛花猕猴桃作为一种具有高效抗肿瘤作用的畲药也备受关注。郭辉辉[22]以毛花猕猴桃为材料，开展毛花猕猴桃氯仿层单体化合物的分离及其抗肿瘤活性机制研究。本节将基于其研究进行说明。
5.5.1 毛花猕猴桃根氯仿层单体化合物分离
1）毛花猕猴桃根微波提取及氯仿层样品制备（流程见图5-2）
微波提取的提取条件为：温度40℃，功率140W，料液比为1:7（g/mL），每次提取7min，反复提取3次，且提取得率计算公式为：得率=氯仿粗提物粉末质量/干燥根粉末质量×100%。
干燥根粉末总质量
2）氯仿层化合物单体分离
（1）用系统溶剂法对生物碱类化合物进行分离，如图5-3所示。
（2）用高效液相色谱法分离酸不溶部分，流程如图5-4所示。
高效液相色谱分离条件:AgilentZorbaxSB-C18色谱柱（5um，9.4mm×l50mm）。
洗脱条件：以水（A相）和甲醇（B相）为流动相进行洗脱。0～30min，A相:25%，B相：75%；30～35min，A相：25%～10%，B相：75%～90%；35～60min，A相：10%，B相:90%。
流速:1mL/min；进样量:20μL；检测波长:280nm；柱温：常温。
5.5.2 毛花猕猴桃根酸不溶部分HPLC图谱分析以及化合物的结构鉴定
5.5.2.1毛花猕猴桃根酸不溶部分HPLC图谱分析
在设定洗脱条件下分离得到7个单峰，见图5-5，按保留时间由小到大依次为化合物
1、2、3、4、5、6、7。这7个单峰的保留时间分别为1号:42.067min；2号:43.483min；3号：44.467min；4号：45.233min；5号：46.717min；6号：51.354min；7号：58.350min。
5.5.2.2 化合物的结构鉴定
经硅胶等色谱分离，获得三个化合物，经分析，与图5-5的HPLC图谱中化合物1、2、4一致。
1）化合物1的结构鉴定
结合1H-NMR和13C-NMR图谱，1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）:0.71（3H，s），
0.82（3H，d，J=6.3Hz），0.87（3H，s），0.93（3H，d，J=8.4Hz），0.94（3H，s），1.04（3H，s），有六个甲基；δ2.11（1H，d，J=12.3Hz，18-Hβ），5.14（1H，brs，H-12）；13C-NMR（100MHz，DMSO-d6:178.2（C-28），138.2（C-13），124.5（C-12），72.5（C-3），64.6（C-2），63.7（C-23）。对照文献，结合质谱结果，推测化合物1可能为2a，3a，24-三羟基-12-烯-28-熊果酸（结构式如图5-6）。
2）化合物2的结构鉴定
结合1H-NMR和13C-NMR图谱，1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）δ:0.71（3H，s），0.82（3H，d，J=6.3Hz），0.87（3H，s），0.93（3H，d，J=8.4Hz），0.94（3H，s），1.04（3H，s），有六个甲基；δ2.11（1H，d，12.3Hz，18-Hβ），5.14（1H，brs，H-12）；13C-NMR（100MHz，DMSO-D
6）δ:178.2（C-28），138.2（C-13），124.5（C-12），72.5（C-3），64.6（C-2），63.8（C-23）。对照文献[23]，结合质谱结果，推测化合物2的结构为2β，3β-二羟基-23-氧代-12-烯-28-熊果酸（结构式如图5-7）。
3）化合物4的结构鉴定
结合1H-NMR和l3C-NMR图谱，1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）δ:0.72（3H，s），0.82（3H，d，J=6.2Hz），0.89（3H，d，J=8.4Hz），0.92（3H，s），1.04（3H，s），1.08（3H，s），有六个甲基；δ2.11（1H，d，J=12.0Hz，18-Hβ）；l3C-NMR（100MHz，DMSO-d6）δ:178.1（C-28），138.1（C-13），124.3（C-12），83.7（C-3），66.9（C-2），63.8（C-23）。对照文献，结合质谱结果，推测化合物4的结构为2a，3a-二羟基-23-甲氧基-12-烯-28-熊果酸（结构式如图5-8所示）。
5.5.3 抗肿瘤活性研究
5.5.3.1 抗肿瘤活性体外研究
1）细胞培养与样品溶液配制
a.细胞培养
将肝癌细胞株BEL-7404培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基中，置于37℃、5%CO2饱和湿度的细胞培养箱中培养，每隔48h更换新鲜培养基。每隔2～3天使用含EDTA的0.25%胰蛋白酶消化传代。实验中选取处于对数生长期的细胞用于实验。
b.样品溶液配制
将毛花猕猴桃根氯仿层冻干粉末溶于DMSO配制成40mg/mL的母液，12000r/min，10min离心，取上清液，过滤除菌后分装待用。
2）毛花猕猴桃根氯仿层对肝癌细胞BEL-7404生长的影响
取对数生长期的BEL-7404接种于96孔板内，每孔加入190μL细胞液，调整细胞密度，使每孔种入3000个细胞。接种后培养8h，待细胞贴壁后，使用培养基将药物配制成不同浓度，每孔加入10μL药物，使其终质量浓度分别为112.5μg/mL，87.5μg/mL，62.5μg/mL，每组设置3个复孔，同时设置终浓度为0.5%DMSO溶剂对照组和终质量浓度分别为3.325μg/mL，0.3325μg/mL，0.03325μg/mL的紫杉醇阳性对照组。自加入化合物Oh、24h、48h、72h、120h、144h，使用胰蛋白酶消化，收集细胞，加入台盼蓝排除死细胞，对每组分别进行计数，所得数据绘制生长曲线（图5-9、图5-10）。
3）毛花猕猴桃根氯仿层对肝癌细胞BEL-7404和正常细胞LO2增殖抑制作用
取对数生长期的BEL-7404、LO2细胞接种于96孔板内，每孔加入190μL细胞液，调整细胞密度，使每孔种入3000个细胞。接种后培养8h，待细胞贴壁后，使用培养基将药物配制成不同浓度，每孔加入10μL药物，使其终质量浓度分别为200μg/mL，175μg/mL，150μg/mL，137.5μg/mL，125μg/mL，112.5μg/mL，100μg/mL，87.5μg/mL，每组设置3个复孔，同时设置终浓度为0.5%DMSO溶剂对照组和终质量浓度分别为3.325μg/mL，1.663|μg/mL，3.325×10-1μg/mL，1.663×10-1|μg/mL，3.325×10-2μg/mL，1.663×10-2μg/mL的紫杉醇阳性对照组。将加药后的96孔板放回培养箱中继续培养72h，取出培养板，每孔加入新鲜配制的0.5mg/mLMTT10μL，继续培养4h，取出培养板，离心3000r/min，10min，吸弃上清液，每孔加入150μLDMSO，于摇床上摇动10min，充分溶解所形成的甲瓒，用酶标仪在490nm处测定各孔吸光度（A），计算样品对细胞生长的抑制率，并计算IC50值。实验重复3次。使用下列公式计算抑制率：
抑制率%=对照组吸光度A均值-实验组吸光度A均值/对照组吸光度A均值-凋零组吸光度A均值×100%
在所设定的87.5～20μg/mL给药浓度范围内，毛花猕猴桃根氯仿层对肝癌细胞株BEL-7404有显著的增殖抑制作用，结果如表5-2所示，由表中数据可知，随着给药浓度的增高，氯仿层对BEL-7404的抑制率越高，可见氯仿层对BEL-7404的抑制作用呈剂量依赖性关系。在200μg/mL给药浓度下作用72h抑制率达到85%以上，半抑制浓度IC50约为114.8日μg/mL。阳性对照药紫杉醇组呈现相似的抑制规律，其半抑制浓度IC50约为6.999×10-1μg/mL。
结果如表5-2所示，在112.5～200μg/mL浓度范围内，毛花猕猴桃根氯仿层对人正常肝细胞LO2有显著的增殖抑制作用，随着给药浓度的增高，氯仿层对LO2的抑制率越高；当浓度下降到100μg/mL以下时，毛花猕猴桃根氯仿层对人正常肝细胞LO2的增殖抑制作用不再明显。同时，由表中数据可知，当给药浓度低于150μg/mL时，毛花猕猴桃根氯仿层对人正常肝细胞LO2的增殖抑制作用要明显小于对肝癌细胞株BEL-7404的增殖抑制作用。计算所得毛花猕猴桃根氯仿层对人正常肝细胞LO2的半抑制浓度IC50约为132.2μg/mL。紫杉醇组除最大浓度组外，其他各组对LO2的抑制作用不明显。
5.5.3.2 抗肿瘤活性体内研究
1）实验方法
a.样品溶液配制
称取适量的灭菌后的氯仿层粉末将其混悬于含10%吐温-80的生理盐水中，配制成均匀的混悬液。
b.H22小鼠肝癌实体瘤模型的建立
抽取小鼠腹水：腹腔注射连续继代3代以上的H22细胞株，选择接种后7～10天，选取肿瘤腹水长势良好的H22肝癌小鼠，颈椎脱臼处死，固定，腹部用碘酒、酒精消毒后，用5mL无菌注射器抽取小鼠腹水，计数，加入台盼蓝检测细胞存活状态，存活率应高于95%。将腹水转移至无菌的离心管中，盖紧胶盖，平衡后离心（1000r/min，5min），弃上清液，加入适量无菌生理盐水，将细胞密度调整至l×l0⁷个/mL，待用。
实体瘤接种：选取健康的ICR小鼠60只，逐个称重，随机选中50只，每只小鼠右腋下皮肤用碘酒、酒精消毒后，以1mL无菌注射器，在无菌条件下，吸取上步制备的细胞悬液0.2mL，注射于小鼠右腋皮下。全程无菌操作，40min内完成接种。
c.分组与给药
在小鼠接种瘤细胞24h后，将50只小鼠随机分成5组，每组10只，分笼饲养，每天定时灌胃给药。另设正常健康的ICR小鼠10只为正常组，各组均自由摄食与饮水，分组灌胃情况如下:①模型对照组，溶剂灌胃，每日一次。②阳性对照组，每天为其进行5-FulOmg/kg腹腔注射，每日一次。③正常组，健康ICR小鼠，溶剂灌胃，每日一次。④药物高剂量组，300mg/kg，灌胃给药，每日一次。⑤药物中剂量组，150mg/kg，灌胃给药，每日一次。⑥药物低剂量组，75mg/kg，灌胃给药，每日一次。
除正常组外，各组均连续灌胃给药10天，停药次日，称取小鼠体重，处死小鼠，用镊子镊住小鼠右腋肿瘤生长部位皮肤，用手术剪剪开皮肤，暴露肿瘤，用镊子钝性剥离肿瘤，电子天平称量瘤重，同时测量肿瘤的长径和短径，逐一记录。
d.指标检测
小鼠体重变化：比较各组小鼠在实验前和处死前体重变化情况，对其生长状况进行观测。
瘤体积：瘤体积的计算按照下列公式
瘤体积（V）=瘤长径（a）×瘤短径（b）²/2
计算各组抑瘤率：抑瘤率％=对照组平均瘤种-治疗组平均瘤种/对照组平均瘤种×100％
2）实验结果分析
a.毛花猕猴桃根氯仿层对H22肝癌小鼠生长的影响
体重：小鼠接种肿瘤前的体重和处理小鼠时的体重以及给药后的存活率如表5-3所示。从表中数据可知，与正常组小鼠和模型对照组小鼠相比，氯仿层处理高、中、低剂量的小鼠体重未出现明显变化，阳性对照组小鼠体重明显下降。
存活率：如表5-3中数据所示，氯仿层处理高、中、低剂量组，均有小鼠死亡，而阳性对照组、模型组、正常组小鼠均未出现死亡现象。
b.毛花猕猴桃根氯仿层对H22肝癌小鼠肿瘤的抑制作用
毛花狒猴桃根氯仿层对H22肝癌小鼠肿瘤体积影响：毛花猕猴桃根氯仿层作用于H22肝癌小鼠后，对H22肝癌小鼠体内肿瘤体积的影响如表5-4所示。低剂量组对H22肝癌小鼠的肿瘤体积有着明显的抑制作用；高、中剂量组对肿瘤体积的抑制作用不明显；阳性对照组呈现明显的抑制作用。
毛花猕猴桃根氯仿层对H22肝癌小鼠肿瘤抑瘤率影响：毛花猕猴桃根氯仿层作用于H22肝癌小鼠后，低剂量组对H22肝癌小鼠肿瘤有着明显的抑制作用，抑瘤率为37.34%；高、中剂量组对肿瘤的抑制作用不明显；阳性对照组对H22肝癌小鼠肿瘤有着明显的抑制作用，抑瘤率为37.17%，如表5-5所示。
p<0.05，与对照组相比。
5.6 炮制和质量标准
5.6.1 白山毛桃根的炮制
取原药，润软，切厚片，干燥。
5.6.2 白山毛桃根的质量标准
经研究表明，可通过鉴别（粉末显微特征、化学反应）、检查（水分、灰分）、浸出物对白山毛桃根的质量进行全面的控制。
1）白山毛桃根的水分
水分按《中国药典》水分测定法中的烘干法检查。根据测定结果（表5-6），将水分限度定为不得过12.0%。
2）白山毛桃根的总灰分
总灰分按《中国药典》灰分测定法中的总灰分测定法检查。根据测定结果（表5-6），将总灰分限度定为不得过4.0%。
3）白山毛桃根的浸出物
浸出物按《中国药典》醇溶性浸出物测定法项下的热浸法检查。根据测定结果（表5-6），用70%乙醇作溶剂，将浸出物的限度定为应不得少于14.0%。
5.7 总结与展望
猕猴桃属植物在我国有很长的药用历史，其中，毛花猕猴桃是畲族民间常见用药之一。随着毛花猕猴桃相关研究的不断深入，其药理作用逐渐被广泛认识，人们的关注度也不断提高。白山毛桃根具有抗肿瘤、增强免疫力、抗氧化等药理作用，有望被开发为一种治疗肿瘤等疾病的天然药物。但当前相关的临床使用和产品仍不是很多，需要展开进一步的研究开发。
参考文献
[1]浙江省食品约品监督管理局.浙江省中药炮制规范[M].北京：中国科技医药出版社，2015:28-29.
[2]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志[M].第49卷.第2分册.北京：科学出版社，1984:196.
[3]蓝金珠，毛花猕猴桃种苗繁育技术[J].现代农业科技，2014，6:122-125.
[4]程文亮，李建良，何伯伟，等.浙江丽水药物志[M].北京：中国农业科学技术出版社，2014:409.
[5]杨艳杰.猕猴桃属植物的研究进展[J].安徽农业科学，2007，35（35）:11454-11457，11459.
[6]徐一新，猕猴桃属植物化学成分和生物活性研究进展[J].解放军药学学报，2011，27（2）:164-170.
[7]黄初升，毛花猕猴桃中的两个新三萜化合物[J].云南植物研究，1988，10（1）:93-100.
[8]黄初升，毛花猕猴桃根中的一个新三萜化合物[J].天然产物研究与开发，1992，4（3）：27-30.
[9]白素平，毛花猕猴桃三萜化学成分的研究[J].天然产物研究与开发，1997，9（1）:15-18.
[10]白素平，毛花猕猴桃地上部分化学成分的研究[J].中草药，1997，28（2）:69-72.
[11]BoldinghH.Seasonalconcentrationsofnon-structuralcarbohydratesoffiveActinidiaspeciesinfruit，leafandfineroottissue[J].AnnBot.2000，85（4）:469-476.
[12]XuHS.ChemicalcompositionandantitumoractivityofdifferentpolysaccharidesfromtherootsofActinidiaeriantha[J]，CarbohydrPolym，2009，78（2）:316-322.
[13]雷后兴.畲药白山毛桃根的药理及应用研究[J].浙江中医杂志，2014.49（2）:146-148.
[14]王晓明，杨祖立，施意，等.毛冬瓜对肝癌细胞株SMMC-7721的抑制作用[J].浙江理工大学学报，2011，28（4）:606-610.
[15]郑燕枝，毛花猕猴桃根化学组分提取工艺及抗胃癌活性研究[D].福建：福建中医药大学硕士学位论文，2013.
[16]王水英，程晓东.白山毛桃根提取物对人红白血病K562细胞作用研究[J].疑难病杂志，2013，12（5）:368-370.
[17]林水花，吴建国，谢通，等.毛花赫猴桃不同部位的抗肿瘤活性比较[J].福建中医药大学学报.2013，23（1）:46-47.
[18]王水英，孙宇，金惠，等.白山毛桃根提取物抑制黑色素瘤M21细胞增殖作用及其机制研究[J].辽宁中医杂志，2013，40（10）:2101-2104.
[19]XuHS，YaoL，SunHX，etal.ChemicalcompositionandantitumoractivityofdifferentpolysaccharidesfromtherootsofActinidiaeriantha[J].CarbohydrPolym，2009，78:316-322.
[20]林少琴，余萍，朱苏闵，等.毛花猕猴桃根粗提物抗癌效应及对小鼠免疫功能影响的初步研究[J].
福建师范大学学报（自然科学版），1987，3（2）:108-110.
[21]DuGR，LiMJ，MaFW，etal.AntioxidantcapacityandtherelationshipwithpolyphenolandVitaminCinActinidiafruits[J]，FoodChem，2009，113（2）:557-562.
[22]郭辉辉.毛花猕猴桃氯仿层单体化合物分离及其抗肿瘤活性机制研究[D].杭州:.浙江理工大学硕士学位论文，2013.
[23]郭维，范玉兰，郑绿茵，等.毛冬瓜根挥发油化学成分分析[J].广西植物，2009，29（4）:564-566.
白山毛桃根，即猕猴桃科（Actinidiaceae）猕猴桃属植物毛花猕猴（ActinidiaerianthaBenth.）的干燥根，以畲族习用药材名义收载于2015年版《浙江省中药炮制规范》[1]。毛花猕猴桃又名毛花杨桃、白藤梨、白毛桃、毛阳桃、毛冬瓜等。
5.1.1 猕猴桃属植物概述
猕猴桃属（ActinidiaLindl）植物是，猕猴桃科一类落叶、半落叶至常绿藤本，共有54种以上，我国有52种以上[2]。其中，中华猕猴桃、美味，猕猴桃、毛花猕猴桃和少量软枣猕猴桃具有较高的经济价值。该属植物自然分布较广，主要分布在亚热带地区，部分分布在温带，其中较多分布在中国、意大利、新西兰、智利、法国、希腊、日本、美国等国家。我国是该属植物的原产地和分布中心，除青海、新疆、内蒙古外，其余各省（尤其是长江流域和各省的山区阴湿地带）均有分布。
该属植物无毛或被毛，毛为简单的柔毛、茸毛、绒毛、绵毛、硬毛、刺毛或分枝的星状绒毛；髓实心或片层状。枝条通常有皮孔；冬芽隐藏于叶座之内或裸露于外。叶为单叶，互生，膜质、纸质或革质，多数具长柄，有锯齿，很少近全缘，叶脉羽状，多数侧脉间有明显的横脉，小脉网状；托叶缺或废退。花白色、红色、黄色或绿色，雌雄异株，单生或排成简单的或分歧的聚伞花序，腋生或生于短花枝下部，有苞片，小；萼片5片，间有2～4片的，分离或基部合生，覆瓦状排列，极少为镣合状排列，雄蕊多数，在雄花中的数目比雌性花的（不育雄蕊）为多，而且较长，花药黄色、褐色、紫色或黑色，丁字式着生，2室，纵裂，基部通常叉开；花盘缺；子房上位，无毛或有毛，球状、柱状或瓶状，多室，有中轴胎座，胚珠多数，倒生，花柱与心皮向数，通常外弯压成放射状；在雄花中存在退化子房。果为浆果，秃净，少数被毛，球形、卵形至柱状长圆形，有斑点（皮孔显著）或无斑点（皮孔几乎不可见）；种子多数，细小，扁卵形，褐色，悬浸于果瓢之中；种皮尽成网状洼点；胚乳肉质，丰富；胚长约为种子一半，圆柱状，直，位于胚乳的中央；子叶短；胚根靠近种脐[1]。
该属植物果实可食；叶可饲猪；枝条浸出液含胶质可供造纸业作调浆剂，并可用于建筑方面与水泥、石灰、黄泥、沙子等混合使用，可起加固作用，用以铺筑路面、晒坪和涂封瓦檐屋脊；根部可作杀虫农药；花是很好的蜜源；许多种类的枝、叶、花、果都十分美观，又适宜栽植于绿化园地作观赏植物。
猕猴桃属植物原产于我国，有悠久的栽培利用历史。早在《诗经•桧风》中《隰有苌楚》便有诗句“隰有苌楚，猗傩其枝”，其中“苌楚”即为猕猴桃，记述河南密县一带有种植猕猴桃。《尔雅•释草》中将“长楚”释为“铫芅”，东晋著名学者郭璞将其注为“羊桃”，《医心方》中也作“羊桃”，现在湖北和四川东部一些地方的百姓仍称之为“羊桃”。唐代著名诗人岑参的诗作《太白东溪张老舍即事，寄舍弟侄等》，其中便有“中庭井阑上，一架猕猴桃”。表明当时便已经开始将猕猴桃作为观赏树种进行栽培。同时，猕猴桃也多次出现在各种医学典著中，如《食经》《食疗本草》《本草拾遗》《开宝本草》《得配本草》《湖南药物志》《闽东本草》《中华本草》《全国中草药汇编》等，具有解热、止渴、健胃、通淋等功效，主治烦热、肺热干咳、消化不良、湿热黄疸、石淋、痔疮，并附有多个配方。
5.1.2 白山毛桃根基原植物形态、鉴别与资源分布
5.1.2.1 基原植物形态
毛花猕猴桃是猕猴桃属一种珍奇的野生落叶藤本植物。幼枝及叶柄密生灰白色或灰褐色绒毛，老枝无毛。叶对生，厚纸质，矩圆形至圆形，基部圆截形至圆楔形，极少近心形，老时上面仅沿叶脉有疏毛，下面密生灰白色或灰褐色星状绒毛。花淡红色，2～3朵成聚伞花序；萼片常为2片，连同花柄密生灰白色绒毛；花瓣5～6瓣，雄蕊多数；花柱丝状，多数。果实表面密生灰白色长绒毛，果肉细嫩多汁，酸甜适宜维生素C含量高。
5.1.2.2 鉴别
1）白山毛桃根的粉末显微特征
本品粉末黄褐色。草酸钙针晶较多，长20～200um。石细胞较多，单个或数个存在，壁厚层纹明显，多呈类方形，少数呈不规则形。木栓细胞较多，多呈类长方形或多角形。导管较大，多破碎，为具缘纹孔导管。淀粉粒较多，单粒多呈圆球形，脐点点状直径2～25um；复粒由2～8个分粒组成。结果见图5-1。
2）白山毛桃根的理化鉴别
白山毛桃根粉末的理化鉴别，参考藤梨根《上海市中药材标准》（1994年版），取粉末0.2g于试管中，加2%氢氧化钠溶液5mL，振摇，取滤液（或离心，取上清液），溶液显棕红色至深红色，在此溶液中滴加5%盐酸溶液，使溶液成酸性，溶液颜色变为黄色至橙色。
5.1.2.3 资源分布
该植物主产于浙江、福建、安徽、湖北、湖南、广东、广酉、贵州等省区，生于海拔250～1000m山地上的高草灌木丛或灌木丛林中。
5.1.3 毛花猕猴桃的繁育与栽培
毛花猕猴桃长势较强，抗逆性、抗病虫害性较强，适应性广，适合在年平均温12～13℃，有效积温4500～5200℃，无霜期210～290天的地区发展。毛花猕猴桃幼苗定植后留4～5个饱满芽定干，萌发后选1～2个让其向上生长，并搭架牵引，逐步形成“1主干2主蔓”基本树形。该树种栽后第二年挂果，第三年投产。
苗木繁育：毛花猕猴桃可通过种子播种、扦插（包括硬枝扦插、嫩枝扦插和根插）、压条和嫁接等方法进行繁育。在生产实践中，应根据现有生产条件，以及对技术的掌握程度，因时因地采用适宜的繁育方式繁育高品质苗木[3]。
施肥管理：毛花猕猴桃施肥管理遵循基肥和追肥相结合的原则。秋施基肥，在树盘周围开环状施肥沟，施入有机肥、化肥，覆土，浇水。春季萌芽前追施萌芽肥，以速效肥为主；果实膨大期追施壮果肥。
整形修剪：休眠期修剪以培养幼树树形，更新成年树结果枝组为主要目的，通过短截、回缩等方式合理配置结果枝组，一般1个主蔓上留4个侧枝。生长季修剪主要通过抹芽、疏枝、摘心等方式控制徒长枝，疏除无用枝。
病虫害管理：毛花猕猴桃抗病虫能力较强，但随着人工栽培的不断规模化，病虫害也相对较多，常见的病虫害主要有：根腐病、溃疡病、褐斑病、炭疽病、灰霉病、叶蝉、东方小薪甲、蝽象及叶螨等。病虫害防治应遵循“预防为主，综合防治”的原则，物理防治与化学防治相结合，采用低毒低残留的农药，并尽量减少施药次数。
5.2 典籍记载与应用
5.2.1 畲医药典籍记载
【药材性状】根圆柱形，长短粗细不一。表面红棕色至紫褐色，凸凹不平，在弯曲处常有横向裂纹和浅陷横沟而略呈结节状。质坚韧，不易折断，断面柴性，皮部红棕色，可见白色结晶物，近皮部的木质部浅棕色，具较多白色结晶物，其他部位的木质部淡红色，导管孔明显，散生有白色结晶物。
【性味】根：味淡、微辛，性寒。叶：味微苦、微辛，性寒。
【功效】根：解毒消肿，清热利湿。叶：解毒消肿，祛瘀止痛，止血敛疮。
【主治】根：热毒痈肿，乳痈，肺热失音，湿热痢疾，淋浊，带下，风湿痹痈，胃癌，食道癌。根皮外用治跌打损伤。叶：痈疽肿毒，乳痈，跌打损伤，骨折，刀伤，冻疮溃破。
【附方】①治胃癌、肠癌：白山毛桃根50g，半枝莲25g，白花蛇舌草25g，三尖杉10g，铁丁角30g，七叶一枝花25～30g，花菇草（香菇）50g，水煎服。②治子宫脱垂：白山毛桃根250g，老虎爪根120g，猪大肠头1节。炖1h，食大肠及汤。③治疔疮：白山毛桃根皮、泡桐叶等量。共研成细粉，与酒槽混匀；用茶叶包好，放入火中炙烤，外敷⑷。
5.2.2 其他医药典籍记载和民间应用
《浙江民间常用草药》记载，毛花猗猴桃可“清热解毒，舒筋活血。治全身疮疳，皮炎，无名肿毒，腹股沟淋巴结炎，跌打损伤”，并有附方如下。①治无名肿毒：鲜毛冬瓜根捣烂或加烧酒捣烂敷患处。②治腹股沟淋巴结炎：毛冬瓜根捣烂，拌酒糟煨热外敷患处，每日1次。③治疝气：毛冬瓜根1两，荔枝2两，鸡蛋2只，加烧酒1杯，水煎。食蛋和药汁。④治全身疳肿、皮炎：毛冬瓜根4～5两，加猪肉适量同煮食。⑤治跌打损伤：毛冬瓜根皮捣烂外敷，另取根4～8两水煎服。
《福建中草药》记载，毛花，猕猴桃可“治肺热失音，大头瘟，湿热带下，石淋，白浊，乳痈，胃癌，鼻癌，乳癌”，并有附方如下。①治肺热失音：毛花杨桃鲜根1两。水煎，调冰糖服。②治湿热带下、石淋、白浊：毛花杨桃鲜根、野兰麻鲜根各1～2两。水煎服。③治大头瘟（颜面丹毒）：毛花杨桃鲜根，用第二次米泪水磨浓汁涂患处。④治乳痈：毛花杨桃鲜叶，加酒糟、红糖各少许，捣烂热敷患处。⑤治胃癌、鼻咽癌、乳癌：毛花杨桃鲜根2两5钱，水煎服，15～20天为一疗程，休息几天后再服，连服4个疗程。
《全国中草药汇编》记载，毛花猕猴桃"果：调中理气，生津润燥，解热除烦，用于消化不良，食欲不振，呕吐，烧烫伤；根、根皮：清热解毒，活血消肿，祛风利湿，用于风湿性关节炎，跌打损伤，丝虫病，肝炎，痢疾，淋巴结结核，痈疖肿毒，癌症此外，《湖南药物志》《闽东本草》《食疗本草》《开宝本草》，以及崔禹锡的《食经》等论著也对毛花猕猴桃有所记载，并有附方如下。①治食欲不振，消化不良：猕猴桃干果2两。水煎服（《湖南药物志》）。②治偏坠：猕猴桃1两，金柑根3钱。水煎去渣，冲入烧酒2两，分2次内服（《闽东本草》）。
5.3 化学成分研究
5.3.1 猕猴桃属的化学成分研究
猕猴桃属的化学成分研究较多，主要包括三萜类、黄酮类等成分。该化学成分的分布及植物来源参见表5-1。
5.3.2 毛花猕猴桃的化学成分研究
毛花猕猴桃化学成分的研究最早见于1988年黄初升[7]的研究，他以毛花猕猴桃根为材料，分离提取出6种化学成分，分别为。β-谷甾醇、胡萝卜苷、熊果酸、2a，3a，24-三羟基-12-烯-28-熊果酸、毛花猕猴桃酸A（24-乙酰氧基-2a，3a-二羟基-12-烯-28-熊果酸）、毛花猕猴桃酸B（2β，3β，23-三羟基-12-烯-28-熊果酸），其中后两种化合物为两种新的三站萜类化合物。此后，又从毛花猕猴桃根中分离出二十四碳酸、葡萄糖，以及一•个新三萜类化合物2a，3β，24-三羟基-12-烯-28-熊果酸[8]。1997年，白素平[9]又从毛花猕猴桃根中分离得到3个三萜类化合物，分别为2β3β-二羟基-23-氧代-12-烯-28-熊果酸（一种新的三萜类化合物）、2a，3β，23-三羟基-12-烯-28-熊果酸、2β，3β-二羟基-12-烯-26-熊果酸。同时，他还对毛花猕猴桃的地上部分进行研究[10]，并首次从其地上部分分离得到毛花猕猴桃酸B（2β，3β，23-三羟基-12-烯-28-熊果酸）、2a，3β，24-三羟基-12-烯-28-熊果酸、熊果酸、伊谷甾醇、β-胡萝卜苷。此外，在糖类化合物的研究中，Boldingh[11]以毛花猕猴桃的叶、根为材料，分离出半乳糖、葡萄糖和甘露聚糖，且其比例为1：2：2；Xu[l2]从毛花猕猴桃的根中分离出AEPA、AEPB、AEPC、AEPD4种多糖成分，它们均由半乳糖、阿拉伯糖和海藻糖构成，只是比例不同。
5.4 药理活性研究
白山毛桃根具有悠久的药用历史，并具有三萜类、糖类，以及类胡萝卜素、谷甾醇等多种化合物，其药理活性也被广泛研究。研究表明，白山毛桃根具有抗肿瘤、增强免疫、抗氧化等活性[13]。
5.4.1 抗肿瘤作用
王晓明等[14]使用系统溶剂法对毛花猕猴桃的根和叶的80%甲醇微波提取物进行初步分离，应用MTT比色法测定其不同溶剂的提取部位对肝癌细胞株SMMC-7721的生长抑制作用，结果表明，氯仿提取物和乙酸乙酯提取物表现出显著的抑制作用，其IC50分别为221.82μg/mL和563.64μg/mL；郑燕枝[15]以人结肠癌细胞（RKO）、肝癌细胞（HepG2）和胃癌细胞（MGC-803、SGC-7901）四种人肿瘤细胞为实验模型，采用MTT法研究了其乙醇总提物及其四个不同极性部位的抗肿瘤活性，结果表明，其抗肿瘤活性部位为乙酸乙酯部位（EE-AER），且其对胃癌细胞SGC-7901抑制活性最强；王水英等[16]研究白山毛桃根提取物对人红白血病K562细胞增殖的抑制作用及其可能的作用机制，结果表明，白山毛桃根提取物能抑制K562细胞增殖和诱导细胞凋亡；林水花等[17]用毛花猕猴桃根、茎、叶不同部位提取对胃癌细胞SGC-7901、乳腺癌细胞MCF-7、鼻咽癌细胞CNE2开展研究，结果表明，毛花猕猴桃地上各部分提取物对三种肿瘤细胞无明显的抑制作用，但其根部提取液对胃癌细胞SGC-7901和鼻咽癌细胞CNE2具有明显的抑制作用，且其乙酸乙酯部位抗肿瘤活性最强；王水英等[18]研究毛花密猴桃根对黑色素瘤M21细胞增殖的影响，结果表明，该提取物可以抑制M21细胞的增殖、侵袭迁移能力。
5.4.2 增强免疫作用
Xu等[19]研究毛花猕猴桃水溶性总糖（AEP）及纯化后的四种多糖（AEPA、AEPB、AEPC、AEPD）的抗肿瘤和免疫调剂作用，结果表明，这些多糖不仅能显著抑制小鼠移植性肿瘤的生长，还能明显促进肿瘤小鼠脾细胞增殖，提高脾细胞中IL-2和IFN-y的水平，增强自然杀伤细胞（NK）和细胞毒素T淋巴细胞（CTL）的活性。而且，他们还发现，从毛花猕猴桃根中提取的水溶性多糖具有很强的提高细胞免疫和体液免疫反应的能力，引起Thl/Th2应激反应的平衡。此外，林少琴等研究发现，毛花猕猴桃根的粗提物可以增强小鼠巨噬细胞的吞噬功能，在药物毒性剂量下，粗提物的功效与其用量成正比。
5.4.3 抗氧化活性
Du等[21]采用多种实验（DPPH、ABTS、ORAC、FRAP、SASR和MCC）对8种猕猴桃属果实的抗氧化能力进行评价，结果表明，与栽培的中华猕猴桃和美味猕猴桃相比，野生的毛花猕猴桃和阔叶猕猴桃果实具有较强的抗氧化能力，且抗氧化能力与其所含多酚类化合物和维生素c的量呈正相关。
5.5 研究实例
当前，癌症是仅次于心血管疾病的世界第二大高发疾病，严重威胁人类的健康。人们对于开发相关抗肿瘤药物进行了大量研究，而毛花猕猴桃作为一种具有高效抗肿瘤作用的畲药也备受关注。郭辉辉[22]以毛花猕猴桃为材料，开展毛花猕猴桃氯仿层单体化合物的分离及其抗肿瘤活性机制研究。本节将基于其研究进行说明。
5.5.1 毛花猕猴桃根氯仿层单体化合物分离
1）毛花猕猴桃根微波提取及氯仿层样品制备（流程见图5-2）
微波提取的提取条件为：温度40℃，功率140W，料液比为1:7（g/mL），每次提取7min，反复提取3次，且提取得率计算公式为：得率=氯仿粗提物粉末质量/干燥根粉末质量×100%。
干燥根粉末总质量
2）氯仿层化合物单体分离
（1）用系统溶剂法对生物碱类化合物进行分离，如图5-3所示。
（2）用高效液相色谱法分离酸不溶部分，流程如图5-4所示。
高效液相色谱分离条件:AgilentZorbaxSB-C18色谱柱（5um，9.4mm×l50mm）。
洗脱条件：以水（A相）和甲醇（B相）为流动相进行洗脱。0～30min，A相:25%，B相：75%；30～35min，A相：25%～10%，B相：75%～90%；35～60min，A相：10%，B相:90%。
流速:1mL/min；进样量:20μL；检测波长:280nm；柱温：常温。
5.5.2 毛花猕猴桃根酸不溶部分HPLC图谱分析以及化合物的结构鉴定
5.5.2.1毛花猕猴桃根酸不溶部分HPLC图谱分析
在设定洗脱条件下分离得到7个单峰，见图5-5，按保留时间由小到大依次为化合物
1、2、3、4、5、6、7。这7个单峰的保留时间分别为1号:42.067min；2号:43.483min；3号：44.467min；4号：45.233min；5号：46.717min；6号：51.354min；7号：58.350min。
5.5.2.2 化合物的结构鉴定
经硅胶等色谱分离，获得三个化合物，经分析，与图5-5的HPLC图谱中化合物1、2、4一致。
1）化合物1的结构鉴定
结合1H-NMR和13C-NMR图谱，1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）:0.71（3H，s），
0.82（3H，d，J=6.3Hz），0.87（3H，s），0.93（3H，d，J=8.4Hz），0.94（3H，s），1.04（3H，s），有六个甲基；δ2.11（1H，d，J=12.3Hz，18-Hβ），5.14（1H，brs，H-12）；13C-NMR（100MHz，DMSO-d6:178.2（C-28），138.2（C-13），124.5（C-12），72.5（C-3），64.6（C-2），63.7（C-23）。对照文献，结合质谱结果，推测化合物1可能为2a，3a，24-三羟基-12-烯-28-熊果酸（结构式如图5-6）。
2）化合物2的结构鉴定
结合1H-NMR和13C-NMR图谱，1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）δ:0.71（3H，s），0.82（3H，d，J=6.3Hz），0.87（3H，s），0.93（3H，d，J=8.4Hz），0.94（3H，s），1.04（3H，s），有六个甲基；δ2.11（1H，d，12.3Hz，18-Hβ），5.14（1H，brs，H-12）；13C-NMR（100MHz，DMSO-D
6）δ:178.2（C-28），138.2（C-13），124.5（C-12），72.5（C-3），64.6（C-2），63.8（C-23）。对照文献[23]，结合质谱结果，推测化合物2的结构为2β，3β-二羟基-23-氧代-12-烯-28-熊果酸（结构式如图5-7）。
3）化合物4的结构鉴定
结合1H-NMR和l3C-NMR图谱，1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）δ:0.72（3H，s），0.82（3H，d，J=6.2Hz），0.89（3H，d，J=8.4Hz），0.92（3H，s），1.04（3H，s），1.08（3H，s），有六个甲基；δ2.11（1H，d，J=12.0Hz，18-Hβ）；l3C-NMR（100MHz，DMSO-d6）δ:178.1（C-28），138.1（C-13），124.3（C-12），83.7（C-3），66.9（C-2），63.8（C-23）。对照文献，结合质谱结果，推测化合物4的结构为2a，3a-二羟基-23-甲氧基-12-烯-28-熊果酸（结构式如图5-8所示）。
5.5.3 抗肿瘤活性研究
5.5.3.1 抗肿瘤活性体外研究
1）细胞培养与样品溶液配制
a.细胞培养
将肝癌细胞株BEL-7404培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基中，置于37℃、5%CO2饱和湿度的细胞培养箱中培养，每隔48h更换新鲜培养基。每隔2～3天使用含EDTA的0.25%胰蛋白酶消化传代。实验中选取处于对数生长期的细胞用于实验。
b.样品溶液配制
将毛花猕猴桃根氯仿层冻干粉末溶于DMSO配制成40mg/mL的母液，12000r/min，10min离心，取上清液，过滤除菌后分装待用。
2）毛花猕猴桃根氯仿层对肝癌细胞BEL-7404生长的影响
取对数生长期的BEL-7404接种于96孔板内，每孔加入190μL细胞液，调整细胞密度，使每孔种入3000个细胞。接种后培养8h，待细胞贴壁后，使用培养基将药物配制成不同浓度，每孔加入10μL药物，使其终质量浓度分别为112.5μg/mL，87.5μg/mL，62.5μg/mL，每组设置3个复孔，同时设置终浓度为0.5%DMSO溶剂对照组和终质量浓度分别为3.325μg/mL，0.3325μg/mL，0.03325μg/mL的紫杉醇阳性对照组。自加入化合物Oh、24h、48h、72h、120h、144h，使用胰蛋白酶消化，收集细胞，加入台盼蓝排除死细胞，对每组分别进行计数，所得数据绘制生长曲线（图5-9、图5-10）。
3）毛花猕猴桃根氯仿层对肝癌细胞BEL-7404和正常细胞LO2增殖抑制作用
取对数生长期的BEL-7404、LO2细胞接种于96孔板内，每孔加入190μL细胞液，调整细胞密度，使每孔种入3000个细胞。接种后培养8h，待细胞贴壁后，使用培养基将药物配制成不同浓度，每孔加入10μL药物，使其终质量浓度分别为200μg/mL，175μg/mL，150μg/mL，137.5μg/mL，125μg/mL，112.5μg/mL，100μg/mL，87.5μg/mL，每组设置3个复孔，同时设置终浓度为0.5%DMSO溶剂对照组和终质量浓度分别为3.325μg/mL，1.663|μg/mL，3.325×10-1μg/mL，1.663×10-1|μg/mL，3.325×10-2μg/mL，1.663×10-2μg/mL的紫杉醇阳性对照组。将加药后的96孔板放回培养箱中继续培养72h，取出培养板，每孔加入新鲜配制的0.5mg/mLMTT10μL，继续培养4h，取出培养板，离心3000r/min，10min，吸弃上清液，每孔加入150μLDMSO，于摇床上摇动10min，充分溶解所形成的甲瓒，用酶标仪在490nm处测定各孔吸光度（A），计算样品对细胞生长的抑制率，并计算IC50值。实验重复3次。使用下列公式计算抑制率：
抑制率%=对照组吸光度A均值-实验组吸光度A均值/对照组吸光度A均值-凋零组吸光度A均值×100%
在所设定的87.5～20μg/mL给药浓度范围内，毛花猕猴桃根氯仿层对肝癌细胞株BEL-7404有显著的增殖抑制作用，结果如表5-2所示，由表中数据可知，随着给药浓度的增高，氯仿层对BEL-7404的抑制率越高，可见氯仿层对BEL-7404的抑制作用呈剂量依赖性关系。在200μg/mL给药浓度下作用72h抑制率达到85%以上，半抑制浓度IC50约为114.8日μg/mL。阳性对照药紫杉醇组呈现相似的抑制规律，其半抑制浓度IC50约为6.999×10-1μg/mL。
结果如表5-2所示，在112.5～200μg/mL浓度范围内，毛花猕猴桃根氯仿层对人正常肝细胞LO2有显著的增殖抑制作用，随着给药浓度的增高，氯仿层对LO2的抑制率越高；当浓度下降到100μg/mL以下时，毛花猕猴桃根氯仿层对人正常肝细胞LO2的增殖抑制作用不再明显。同时，由表中数据可知，当给药浓度低于150μg/mL时，毛花猕猴桃根氯仿层对人正常肝细胞LO2的增殖抑制作用要明显小于对肝癌细胞株BEL-7404的增殖抑制作用。计算所得毛花猕猴桃根氯仿层对人正常肝细胞LO2的半抑制浓度IC50约为132.2μg/mL。紫杉醇组除最大浓度组外，其他各组对LO2的抑制作用不明显。
5.5.3.2 抗肿瘤活性体内研究
1）实验方法
a.样品溶液配制
称取适量的灭菌后的氯仿层粉末将其混悬于含10%吐温-80的生理盐水中，配制成均匀的混悬液。
b.H22小鼠肝癌实体瘤模型的建立
抽取小鼠腹水：腹腔注射连续继代3代以上的H22细胞株，选择接种后7～10天，选取肿瘤腹水长势良好的H22肝癌小鼠，颈椎脱臼处死，固定，腹部用碘酒、酒精消毒后，用5mL无菌注射器抽取小鼠腹水，计数，加入台盼蓝检测细胞存活状态，存活率应高于95%。将腹水转移至无菌的离心管中，盖紧胶盖，平衡后离心（1000r/min，5min），弃上清液，加入适量无菌生理盐水，将细胞密度调整至l×l0⁷个/mL，待用。
实体瘤接种：选取健康的ICR小鼠60只，逐个称重，随机选中50只，每只小鼠右腋下皮肤用碘酒、酒精消毒后，以1mL无菌注射器，在无菌条件下，吸取上步制备的细胞悬液0.2mL，注射于小鼠右腋皮下。全程无菌操作，40min内完成接种。
c.分组与给药
在小鼠接种瘤细胞24h后，将50只小鼠随机分成5组，每组10只，分笼饲养，每天定时灌胃给药。另设正常健康的ICR小鼠10只为正常组，各组均自由摄食与饮水，分组灌胃情况如下:①模型对照组，溶剂灌胃，每日一次。②阳性对照组，每天为其进行5-FulOmg/kg腹腔注射，每日一次。③正常组，健康ICR小鼠，溶剂灌胃，每日一次。④药物高剂量组，300mg/kg，灌胃给药，每日一次。⑤药物中剂量组，150mg/kg，灌胃给药，每日一次。⑥药物低剂量组，75mg/kg，灌胃给药，每日一次。
除正常组外，各组均连续灌胃给药10天，停药次日，称取小鼠体重，处死小鼠，用镊子镊住小鼠右腋肿瘤生长部位皮肤，用手术剪剪开皮肤，暴露肿瘤，用镊子钝性剥离肿瘤，电子天平称量瘤重，同时测量肿瘤的长径和短径，逐一记录。
d.指标检测
小鼠体重变化：比较各组小鼠在实验前和处死前体重变化情况，对其生长状况进行观测。
瘤体积：瘤体积的计算按照下列公式
瘤体积（V）=瘤长径（a）×瘤短径（b）²/2
计算各组抑瘤率：抑瘤率％=对照组平均瘤种-治疗组平均瘤种/对照组平均瘤种×100％
2）实验结果分析
a.毛花猕猴桃根氯仿层对H22肝癌小鼠生长的影响
体重：小鼠接种肿瘤前的体重和处理小鼠时的体重以及给药后的存活率如表5-3所示。从表中数据可知，与正常组小鼠和模型对照组小鼠相比，氯仿层处理高、中、低剂量的小鼠体重未出现明显变化，阳性对照组小鼠体重明显下降。
存活率：如表5-3中数据所示，氯仿层处理高、中、低剂量组，均有小鼠死亡，而阳性对照组、模型组、正常组小鼠均未出现死亡现象。
b.毛花猕猴桃根氯仿层对H22肝癌小鼠肿瘤的抑制作用
毛花狒猴桃根氯仿层对H22肝癌小鼠肿瘤体积影响：毛花猕猴桃根氯仿层作用于H22肝癌小鼠后，对H22肝癌小鼠体内肿瘤体积的影响如表5-4所示。低剂量组对H22肝癌小鼠的肿瘤体积有着明显的抑制作用；高、中剂量组对肿瘤体积的抑制作用不明显；阳性对照组呈现明显的抑制作用。
毛花猕猴桃根氯仿层对H22肝癌小鼠肿瘤抑瘤率影响：毛花猕猴桃根氯仿层作用于H22肝癌小鼠后，低剂量组对H22肝癌小鼠肿瘤有着明显的抑制作用，抑瘤率为37.34%；高、中剂量组对肿瘤的抑制作用不明显；阳性对照组对H22肝癌小鼠肿瘤有着明显的抑制作用，抑瘤率为37.17%，如表5-5所示。
p<0.05，与对照组相比。
5.6 炮制和质量标准
5.6.1 白山毛桃根的炮制
取原药，润软，切厚片，干燥。
5.6.2 白山毛桃根的质量标准
经研究表明，可通过鉴别（粉末显微特征、化学反应）、检查（水分、灰分）、浸出物对白山毛桃根的质量进行全面的控制。
1）白山毛桃根的水分
水分按《中国药典》水分测定法中的烘干法检查。根据测定结果（表5-6），将水分限度定为不得过12.0%。
2）白山毛桃根的总灰分
总灰分按《中国药典》灰分测定法中的总灰分测定法检查。根据测定结果（表5-6），将总灰分限度定为不得过4.0%。
3）白山毛桃根的浸出物
浸出物按《中国药典》醇溶性浸出物测定法项下的热浸法检查。根据测定结果（表5-6），用70%乙醇作溶剂，将浸出物的限度定为应不得少于14.0%。
5.7 总结与展望
猕猴桃属植物在我国有很长的药用历史，其中，毛花猕猴桃是畲族民间常见用药之一。随着毛花猕猴桃相关研究的不断深入，其药理作用逐渐被广泛认识，人们的关注度也不断提高。白山毛桃根具有抗肿瘤、增强免疫力、抗氧化等药理作用，有望被开发为一种治疗肿瘤等疾病的天然药物。但当前相关的临床使用和产品仍不是很多，需要展开进一步的研究开发。
参考文献
[1]浙江省食品约品监督管理局.浙江省中药炮制规范[M].北京：中国科技医药出版社，2015:28-29.
[2]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志[M].第49卷.第2分册.北京：科学出版社，1984:196.
[3]蓝金珠，毛花猕猴桃种苗繁育技术[J].现代农业科技，2014，6:122-125.
[4]程文亮，李建良，何伯伟，等.浙江丽水药物志[M].北京：中国农业科学技术出版社，2014:409.
[5]杨艳杰.猕猴桃属植物的研究进展[J].安徽农业科学，2007，35（35）:11454-11457，11459.
[6]徐一新，猕猴桃属植物化学成分和生物活性研究进展[J].解放军药学学报，2011，27（2）:164-170.
[7]黄初升，毛花猕猴桃中的两个新三萜化合物[J].云南植物研究，1988，10（1）:93-100.
[8]黄初升，毛花猕猴桃根中的一个新三萜化合物[J].天然产物研究与开发，1992，4（3）：27-30.
[9]白素平，毛花猕猴桃三萜化学成分的研究[J].天然产物研究与开发，1997，9（1）:15-18.
[10]白素平，毛花猕猴桃地上部分化学成分的研究[J].中草药，1997，28（2）:69-72.
[11]BoldinghH.Seasonalconcentrationsofnon-structuralcarbohydratesoffiveActinidiaspeciesinfruit，leafandfineroottissue[J].AnnBot.2000，85（4）:469-476.
[12]XuHS.ChemicalcompositionandantitumoractivityofdifferentpolysaccharidesfromtherootsofActinidiaeriantha[J]，CarbohydrPolym，2009，78（2）:316-322.
[13]雷后兴.畲药白山毛桃根的药理及应用研究[J].浙江中医杂志，2014.49（2）:146-148.
[14]王晓明，杨祖立，施意，等.毛冬瓜对肝癌细胞株SMMC-7721的抑制作用[J].浙江理工大学学报，2011，28（4）:606-610.
[15]郑燕枝，毛花猕猴桃根化学组分提取工艺及抗胃癌活性研究[D].福建：福建中医药大学硕士学位论文，2013.
[16]王水英，程晓东.白山毛桃根提取物对人红白血病K562细胞作用研究[J].疑难病杂志，2013，12（5）:368-370.
[17]林水花，吴建国，谢通，等.毛花赫猴桃不同部位的抗肿瘤活性比较[J].福建中医药大学学报.2013，23（1）:46-47.
[18]王水英，孙宇，金惠，等.白山毛桃根提取物抑制黑色素瘤M21细胞增殖作用及其机制研究[J].辽宁中医杂志，2013，40（10）:2101-2104.
[19]XuHS，YaoL，SunHX，etal.ChemicalcompositionandantitumoractivityofdifferentpolysaccharidesfromtherootsofActinidiaeriantha[J].CarbohydrPolym，2009，78:316-322.
[20]林少琴，余萍，朱苏闵，等.毛花猕猴桃根粗提物抗癌效应及对小鼠免疫功能影响的初步研究[J].
福建师范大学学报（自然科学版），1987，3（2）:108-110.
[21]DuGR，LiMJ，MaFW，etal.AntioxidantcapacityandtherelationshipwithpolyphenolandVitaminCinActinidiafruits[J]，FoodChem，2009，113（2）:557-562.
[22]郭辉辉.毛花猕猴桃氯仿层单体化合物分离及其抗肿瘤活性机制研究[D].杭州:.浙江理工大学硕士学位论文，2013.
[23]郭维，范玉兰，郑绿茵，等.毛冬瓜根挥发油化学成分分析[J].广西植物，2009，29（4）:564-566.
