宁德市图书馆 内容
掌叶覆盆子生长地域、环境、条件、年份不同，会造成其品质差异。此外，掌叶覆盆子所含化学成分复杂，迄今已报道掌叶覆盆子果实和叶中的化学成分包括酚酸类、黄酮类、生物碱类、甾醇类、萜类、香豆素类、长链脂肪族类、有机酸等。
郭卿等[56]采用掌叶覆盆子中的山柰酚-3-0-芸香糖苷作为其质量控制化合物，建立了掌叶覆盆子药材中山奈酚-3-0-芸香糖苷的HPLC含量测定方法，并对其进行了TLC定性鉴别及水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物检测，该方法操作简便、结果可靠、重复性好。
柴伟等[57]建立HPLC测定掌叶覆盆子中椴树苷含量的方法，该法使用的色谱条件为：
DiamonsilC18色谱柱（4.6mm×250mm，5um）；流动相为甲醇-1%冰醋酸（55：45），流速1mL/min；检测波长315nm；柱温30℃。在此色谱条件下，椴树苷色谱峰能与其他非被测物质色谱峰达到基线分离，结果见图3-5。该分析方法简便、准确、灵敏，可为掌叶覆盆子的质量控制提供参考。
陈林霖等[58]利用反相HPLC法测定浙江、四川、福建等7个产地掌叶覆盆子药材指纹图谱，色谱条件为：All-techC18柱（250mm×4.6mm，5um），流动相为乙腈（A）-水（B），采用梯度洗脱，B相0～45min（94%～85%），45～70min（85%～75%），70～90min（75%～60%），90min（停止），以1.0mL/min流速于211nm波长处进行检测，进样量20μL，柱温40℃。结果共检出15个分离度良好的共有峰（图3-6和图3-7），该方法可作为控制掌叶覆盆子药材质量的定性标准。苗菊茹等[59]也比较了20个不同来源的掌叶覆盆子药材甲醇提取物的HPLC图谱，结果共检出10个分离度良好的共有峰。
此外，HPLC法测定掌叶覆盆子中的鞣花酸、异槲皮苷、山奈酚-3-0-β-D-吡喃葡萄糖苷、山柰酚、覆盆子苷-F5、没食子酸等成分，也可用于掌叶覆盆子药材的质量控制[60-62]。
本项目组的研究表明，可通过鉴别（粉末显微特征）、检查（水分、灰分）、浸出物、含量测定（高效液相色谱）对搁公扭根的质量进行全面的控制。
3.6.2.1 搁公扭根的检查
1）搁公扭根的水分
水分按《中国药典》水分测定法中的烘干法检查。根据测定结果（表3-11），将水分限度定为不得过12.0%。
2）搁公扭根的总灰分
总灰分按《中国药典》灰分测定法中的总灰分测定法检查。根据测定结果（表3-11），将总灰分限度定为不得过4.0%。
3）搁公扭根的浸出物
浸出物按《中国药典》醇溶性浸出物测定法项下的热浸法检查。根据测定结果（表3-11），将浸出物的限度定为应不得少于15.0%。
3.6.2.2 搁公扭根的含量测定
掌叶覆盆子所含化学成分较为复杂，现已报道的掌叶覆盆子果实和叶中的化学成分包括甾醇类、黄酮类、萜类、香豆素类、长链脂肪族类、有机酸等。搁公扭根中的化合物类型类似，主要含有黄酮类、有机酸及萜类。经研究发现掌叶覆盆子根中含有大量的没食子酸，现代药理研究表明，没食子酸具有抗菌、清除自由基、促进血小板凝集、诱导细胞凋亡等功能，因此以没食子酸作为含量测定指标成分。
本节采用超声和加热回流两种提取方法，考察了50%乙醇、70%乙醇、乙醇和4.2%盐酸溶液的提取效果，结果显示以4.2%盐酸溶液加热回流提取效果最好。在此基础上，考察了盐酸浓度（2.1%、4.2%、6.4%）、提取时间（2h、3h、4h）、溶剂容量（25mL、50mL、75mL）的提取效果。根据测定结果，拟定0.3g药材加4.2%盐酸溶液50mL，加热回流3h为没食子酸提取方法。
图3-6掌叶覆盆子样品HPLC指纹图谱
图3-7不同产地掌叶覆盆子HPLC指纹图谱
A.浙江；B.四川；C.福建；D.陕西；E.安徽；F.江西：G贵州
1）仪器与试药
Agilent1260高效液相色谱仪（美国安捷伦科技有限公司）；G4212B二极管阵列检测器（美国安捷伦科技有限公司）；XS104电子天平（XS105DU，瑞士梅特勒公司），水浴锅（上海梅香仪器公司）。
液相所用乙腈和磷酸均为色谱纯，水为纯化水，盐酸（36%～38%）为分析纯。没食子酸对照品（批号:110831-200803，含量90.1%，使用前无需处理）购自中国药品生物制品检定所。
2）对照品溶液的制备
精密称取没食子酸对照品适量，加甲醇制成没食子酸浓度为38.81μg/mL的溶液，作为对照品储备液。
3）供试品溶液的制备
称取搁公扭根干燥药材粉末（过2号筛）0.3g，精密称定，加入4.2%盐酸溶液50mL，加热回流提取3h，取出放冷，以4.2%盐酸溶液补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液2mL置10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，播匀，用0.45um微孔滤膜滤过，取续滤液即得。
4）系统适用性实验
色谱柱：AgilentZorbaxSB-C18色谱柱（4.6mm×250mm，5um），柱温：30℃；流动相：甲醇-0.4%磷酸水溶液（5：95）；流速：1.0mL/min；检测波长:273nm；进样量:5μL。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液进样，记录色谱图，见图3-8。可见在该色谱条件下，没食子酸与其他成分可达到基线分离，保留时间约为9.2min，理论塔板数在5000以上，分离效能较好。
郭卿等[56]采用掌叶覆盆子中的山柰酚-3-0-芸香糖苷作为其质量控制化合物，建立了掌叶覆盆子药材中山奈酚-3-0-芸香糖苷的HPLC含量测定方法，并对其进行了TLC定性鉴别及水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物检测，该方法操作简便、结果可靠、重复性好。
柴伟等[57]建立HPLC测定掌叶覆盆子中椴树苷含量的方法，该法使用的色谱条件为：
DiamonsilC18色谱柱（4.6mm×250mm，5um）；流动相为甲醇-1%冰醋酸（55：45），流速1mL/min；检测波长315nm；柱温30℃。在此色谱条件下，椴树苷色谱峰能与其他非被测物质色谱峰达到基线分离，结果见图3-5。该分析方法简便、准确、灵敏，可为掌叶覆盆子的质量控制提供参考。
陈林霖等[58]利用反相HPLC法测定浙江、四川、福建等7个产地掌叶覆盆子药材指纹图谱，色谱条件为：All-techC18柱（250mm×4.6mm，5um），流动相为乙腈（A）-水（B），采用梯度洗脱，B相0～45min（94%～85%），45～70min（85%～75%），70～90min（75%～60%），90min（停止），以1.0mL/min流速于211nm波长处进行检测，进样量20μL，柱温40℃。结果共检出15个分离度良好的共有峰（图3-6和图3-7），该方法可作为控制掌叶覆盆子药材质量的定性标准。苗菊茹等[59]也比较了20个不同来源的掌叶覆盆子药材甲醇提取物的HPLC图谱，结果共检出10个分离度良好的共有峰。
此外，HPLC法测定掌叶覆盆子中的鞣花酸、异槲皮苷、山奈酚-3-0-β-D-吡喃葡萄糖苷、山柰酚、覆盆子苷-F5、没食子酸等成分，也可用于掌叶覆盆子药材的质量控制[60-62]。
本项目组的研究表明，可通过鉴别（粉末显微特征）、检查（水分、灰分）、浸出物、含量测定（高效液相色谱）对搁公扭根的质量进行全面的控制。
3.6.2.1 搁公扭根的检查
1）搁公扭根的水分
水分按《中国药典》水分测定法中的烘干法检查。根据测定结果（表3-11），将水分限度定为不得过12.0%。
2）搁公扭根的总灰分
总灰分按《中国药典》灰分测定法中的总灰分测定法检查。根据测定结果（表3-11），将总灰分限度定为不得过4.0%。
3）搁公扭根的浸出物
浸出物按《中国药典》醇溶性浸出物测定法项下的热浸法检查。根据测定结果（表3-11），将浸出物的限度定为应不得少于15.0%。
3.6.2.2 搁公扭根的含量测定
掌叶覆盆子所含化学成分较为复杂，现已报道的掌叶覆盆子果实和叶中的化学成分包括甾醇类、黄酮类、萜类、香豆素类、长链脂肪族类、有机酸等。搁公扭根中的化合物类型类似，主要含有黄酮类、有机酸及萜类。经研究发现掌叶覆盆子根中含有大量的没食子酸，现代药理研究表明，没食子酸具有抗菌、清除自由基、促进血小板凝集、诱导细胞凋亡等功能，因此以没食子酸作为含量测定指标成分。
本节采用超声和加热回流两种提取方法，考察了50%乙醇、70%乙醇、乙醇和4.2%盐酸溶液的提取效果，结果显示以4.2%盐酸溶液加热回流提取效果最好。在此基础上，考察了盐酸浓度（2.1%、4.2%、6.4%）、提取时间（2h、3h、4h）、溶剂容量（25mL、50mL、75mL）的提取效果。根据测定结果，拟定0.3g药材加4.2%盐酸溶液50mL，加热回流3h为没食子酸提取方法。
图3-6掌叶覆盆子样品HPLC指纹图谱
图3-7不同产地掌叶覆盆子HPLC指纹图谱
A.浙江；B.四川；C.福建；D.陕西；E.安徽；F.江西：G贵州
1）仪器与试药
Agilent1260高效液相色谱仪（美国安捷伦科技有限公司）；G4212B二极管阵列检测器（美国安捷伦科技有限公司）；XS104电子天平（XS105DU，瑞士梅特勒公司），水浴锅（上海梅香仪器公司）。
液相所用乙腈和磷酸均为色谱纯，水为纯化水，盐酸（36%～38%）为分析纯。没食子酸对照品（批号:110831-200803，含量90.1%，使用前无需处理）购自中国药品生物制品检定所。
2）对照品溶液的制备
精密称取没食子酸对照品适量，加甲醇制成没食子酸浓度为38.81μg/mL的溶液，作为对照品储备液。
3）供试品溶液的制备
称取搁公扭根干燥药材粉末（过2号筛）0.3g，精密称定，加入4.2%盐酸溶液50mL，加热回流提取3h，取出放冷，以4.2%盐酸溶液补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液2mL置10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，播匀，用0.45um微孔滤膜滤过，取续滤液即得。
4）系统适用性实验
色谱柱：AgilentZorbaxSB-C18色谱柱（4.6mm×250mm，5um），柱温：30℃；流动相：甲醇-0.4%磷酸水溶液（5：95）；流速：1.0mL/min；检测波长:273nm；进样量:5μL。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液进样，记录色谱图，见图3-8。可见在该色谱条件下，没食子酸与其他成分可达到基线分离，保留时间约为9.2min，理论塔板数在5000以上，分离效能较好。
