宁德市图书馆

笔者所在的研究组曾对掌叶覆盆子的果实和根进行化学成分和药理活性的研究。初步研究发现掌叶覆盆子中富含三萜类化合物，通过进一步系统的化学成分分离，从活性部位共分离得到22个化合物。根据理化性质及波谱分析，鉴定出其中20个化合物（图3-2）:对羟基苯甲酸（1），鞣花酸（2）；三个有机酸酯类化合物：邻苯二甲酸二丁酯（3）、邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（4）和没食子酸乙酯（5）；八个黄酮类化合物：香橙素（6）、山奈酚（7）、棚皮素（8）、搠皮昔（9）、异棚皮苷（10）、金丝桃苷（11）、椴树苷（12）和顺式椴树苷（13）；2-羟基喹琳-4-羧酸（14），β-谷甾醇（15），胡萝卜苷（16），熊果酸（17），齐墩果酸（18），蔷薇酸（19），11a-羟基蔷薇酸（20）。
  3.5.1 掌叶覆盆子中化学成分的提取分离流程
  根据生物活性跟踪实验，掌叶覆盆子果实的氯仿部位具有较强的抑制NF-kB激活作用，从中分离、鉴定了3个化合物，乙酸乙酯部位具有较强的植物雌激素样作用，从中分离、鉴定了17个化合物。从掌叶覆盆子根中分离、鉴定了5个化合物。掌叶覆盆子果实（图3-3）和掌叶覆盆子根（图3-4）的提取分离过程见实验流程图。
  3.5.2 化合物的结构鉴定
  3.5.2.1 化合物1的结构鉴定及理化数据
  白色针状晶体（甲醇），mp214～216℃，不溶于氯仿，易溶于甲醇。在预制硅胶板上点样展开，当展开剂为氯仿-甲醇（8：1）和石油醚-乙酸乙酯（3:2）时的Rf值分别为0.26和0.30。该化合物的ESI-MS与质谱数据库中的对羟基苯甲酸完全重叠，IR、1H-NMR及13C-NMR数据也与对羟基苯甲酸相符[49]，故推定其为对羟基苯甲酸（p-hydroxybenzonicacid）。其1H-NMR及C-NMR数据见表3-4。
  lR（cm-1）:3385，3200～2300（宽、强），1674，1610，1594，1510，1420，1242，1168，854，769。ESI-MSm/z（丰度值，％）:138（74.6），121（100），93（27.6），65（18.8）。
  3.5.2.2 化合物2的结构鉴定及理化数据
  淡黄色针状结晶（吡啶），NaOH试液反应显黄色，三氯化铁反应显绿色，Molish反应阴性，茴香醛-浓硫酸反应显橙红色，不溶于水和常用的有机溶剂，可溶于吡啶。红外光谱和核磁数据与文献相符351，故推定其为鞣花酸（ellagicacid）=其1H-NMR及13C-NMR数据见表3-5。
  IRvCcm-1）:3092，1714，1621，1582，1509，1441，1336，1186，1102，1055，1015，983，919，757。
  3.5.2.3 化合物3的结构鉴定
  油状无色液体，不溶于水，溶于甲醇、氯仿。在预制硅胶板上点样展开，展开剂为环己烷-乙酸乙酯（8:1）时的Rf值为0.75。其1H-NMR、13C-NMR数据与文献[50]和SDBS数据库中化合物的数据相符，故推定其为邻苯二甲酸二丁酯（dibutylphthalate）o其1H-NMR及13C-NMR数据见表3-6。
  3.5.2.4 化合物6的结构鉴定
  浅黄色无定形粉末（甲醇），溶于丙酮、甲醇。盐酸-镁粉反应阳性。其1H-NMR、13C-NMR数据基本与文献[51]相符，根据二维谱对文献中6、8位碳的核磁数据归属进行了修正。推定该化合物为香橙素（aromadendrin）。其1H-NMR及l3C-NMR数据见表3-7。
  3.5.2.5 化合物9的结构鉴定
  黄色颗粒结晶（甲醇），mp181～183℃，盐酸-镁粉反应阳性，Molish反应呈阳性，酸水解产物经薄层检查，糖为鼠李糖，首元为槲皮素。核磁数据与文献[52]报道棚皮甘一致，多种溶剂系统中薄层色谱（TLC）的化值和斑点呈色与槲皮苷标准品一致，故推定该化合物为槲皮苷（quercitrin）。其1H-NMR及13C-NMR数据见表3-8。
  3.5.2.6 化合物12的结构鉴定
  黄色针状结晶（甲醇），mp268～270℃，盐酸-镁粉反应阳性，Molish反应呈阳性，显示为羟基取代黄酮类化合物。1H-NMR图谱中的δ6.11（1H，brs），δ6.28（1H，brs）是5，7二羟基取代黄酮A环6，8位的质子信号（未显示为d峰），δ7.97（2H，d，J=8.6Hz）和δ6.80（2H，d，J=8.6Hz）是黄酮B环2'，6'，T，5，位质子的特征信号；86.08（1H，d，J=16.0Hz）和δ7.41（1H，d，J=16.0Hz）为反式烯键质子，结合13C-NMR化学位移δ115.6和147.4推测分子中可能含有a，β不饱和羰基的双键；δ
  7.30（2H，d，J=8.6Hz）和δ6.79（2H，d，J=8.6Hz）显示分于中还有一个对位取代的苯环；在低场区没有其他信号说明黄酮3位被取代，推测该化合物为3，5，7，4，-四取代黄酮。δ5.22（1H，d，J=7.1Hz）为β-D-糖端基氢信号。%-NMR中共26个吸收信号，其中S133.0、132.0、117.6、116.8均为2个双键碳的信号，从而分子共有30个碳；δ160.1、136.0、180.1为黄酮2，3，4位的特征信号。与山柰酚碳谱数据相比，化合物12（表3-9）3位碳向高场移动，2位碳和4位碳向低场移动，推测糖可能接在3位；δ169.6为a，β不饱和酯羰基的碳信号；δ104.9、78.8、76.6、76.5、72.5、65.1为β-D-葡萄糖的碳信号，6位碳移向低场说明葡萄糖的6位可能成酯。由此，分子可推出山奈酚-3-O-P-D-毗喃葡萄糖片段和肉桂酰基片段’该化合物的'H-NMR、"c-NMR数据与文献[53]中的kaempferol-3-O-P-D-（6-（9-/rans-/?-couniaroyl）glucopyranoside一致，故推定该化合物是椴树苷（tiliroside）。
  3.5.2.7 化合物13的结构鉴定
  黄色针状结晶（甲醇），盐酸-镁粉反应阳性，Molish反应呈阳性，显示为羟基取代黄酮类化合物。该化合物原本与化合物12相混，后使用SephadexLH-20和制备TLC等各种手段反复纯化得以成功分离。1H-NMR图谱的差异之处主要在肉桂酰基的a，β-不饱和双键上，δ5.52（lH，d，J=12.9Hz）和δ6.71（1H-NMR，d，J=12.9Hz）显示其为顺式双键。1H-NMR图谱上其他数据以及13CA-NMR数据均与化合物12接近（表3-9），推测其为kaempferol-3-O-β-D-（6-O-cic-p-coumaroyl）glucopyrano-
  side。该化合物的1H-NMR、l3C-NMR数据与文献[53]一致，推定其为顺式椴树苷（cis-tiliroside）。
  3.5.2.8 化合物19的结构鉴定及理化数据
  白色无定形粉末（甲醇），mp268～270℃。可溶于氯仿-甲醇、吡啶。在预制硅胶板上点样展开，30%硫酸加热后显红色。1H-NMR、13C-NMR数据与文献[54]相符，故推定为2a，3a，19a-trihydroxy-urs-12-en-28-oicacid，即蔷薇酸（euscaphicacid）。其lH-NMR及13C-NMR数据见表3-10。
  ESI-MS（w/z）:511（[M+Na]+），409，345，305，278；488（[M「），487（[M-H]-），280，255。
  3.5.3 实验结果与讨论
  我们在植物雌激素样作用和抑制NF-kB激活作用两种药理活性的指导下，从掌叶覆盆子果实乙醇浸膏的乙酸乙酯部位和氯仿部位共分离得到20个化合物，鉴定了其中的18个化合物。
  从已分离得到的化合物的类别上看，主要包括有机酸、有机酸酯、黄酮、生物碱、甾醇、三萜类化合物。其中3个有机酸酯类化合物邻苯二甲酸二丁酯（3）、邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯⑷和没食子酸乙酯（5），3个黄酮类化合物香橙素（6）、槲皮苷（9）和顺式椴树苷（13），以及一个生物碱2-羟基喹啉-4-羧酸（14）都是首次从该植物中分离得到。
  从化学成分分离的结果上看，我们的研究结果与先前的文献报道存在较大的差异。这一差异的产生，一方面可能是由于药材来源和获得总浸膏方法上的差异引起：我们的药材产于浙江，渗漉提取，文献报道的药材分别产于江西、浙江、安徽，均是回流提取；另一方血还可能是由于我们的分离过程是在药理活性指导下进行的，并未对各部位化学成分进行全面分离。
  日本学者曾报道从掌叶覆盆子中分离得到覆盆子酸和覆盆子苷F5，并认为是掌叶覆盆子中较特征的成分，但至今尚未在我国所产的掌叶覆盆子中发现，这一差异可能是由于植物的产地不同引起的。
  文献报道掌叶覆盆子果实中含有异槲皮苷isoquercitrin[25]。经检索，isoquercitrin是槲皮苷-3-0-β-D-呋喃葡萄糖苷的别称。此外，本实验也分离得到了该化合物，其正确别称应是陆地棉苷（hirsutrin）。
  2-羟基喹啉-4-羧酸（14）是一个报道较少的生物碱成分，1945年首次在罂粟中分离得到[55]，这是首次从蔷薇科植物中分离得到该化合物。
  掌叶覆盆子根中富含三萜类化合物，已分离得到并鉴定清楚结构的三糖类化合物包括熊果酸（17）、蔷薇酸（19）和11a-羟基蔷薇酸（20），其中蔷薇酸的含量很高，氯仿部位分离得到的蔷薇酸的含量高达0.1%。