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定量分析是评价畲药质量的重要手段，对于保证畲药有效性和安全性意义重大。目前常用的方法有分光光度法和色谱法，主要有紫外-可见分光光度法、气相色谱法、高效液相色谱法等。分光光度法主要用于定量分析畲药中的大类成分，如总黄酮的含量测定。色谱法用于定量分析畲药中的有效成分或者指标成分，如柳叶蜡梅中山奈酚-3-0-芸香糖苷等成分的含量测定。
对于畲药中多类成分的同时分析，一般选择紫外、二极管阵列检测器分析有紫外吸收的成分。若成分没有紫外吸收，则可以选择通用型检测器，如蒸发光散射检测器、质谱检测器等。其中，质谱检测器更为专属和灵敏，与液相或气相色谱设备联用后可实现不同结构类型成分的同时检测。
传统的多指标含量测定要求种类繁多的对照品，当化学成分对照品难以获取、价格昂贵或稳定性差时，可以采用替代对照品测定法实现多成分的同时定量分析，以一测多评法最为常用，即使用一个对照品同时定量分析多个待测成分。其基本原理：依据在一定的范围（线性范围）内成分的量（浓度或质量）与检测器响应成正比的原理，符合朗伯-比尔定律。在多指标质量评价时，假设某样品中含有，•个组分，（1=1，2，…，k，…，贝），式中4•为组分峰面积，Ｗｉ为组分浓度。选取其中的一个组分&为参照物，建立组分*与其他组分四之间的相对校正因子心队WdWmXWW，由此可导出计算公式：脂阳曲（fmQ，其中4为内参物的峰面积，阿为内参物的浓度，九，为其他组分峰面积，厶为其他组分协的浓度。相对校正因子理论上为恒定值。为保证测定结果的准确性，待测成分与参照物以同类成分为宜，紫外检测器可行性最佳。待测成分的定位和相对校正因子的测定与耐用性考察是一测多评的关键因素。
用于定量分析的方法必须进行验证，以证明釆用的含量测定方法符合相应分析要求。验证内容包括：专属性、准确度、精密度、线性、范围、检测限、定量限、耐用性。
(―)准确度
准确度(accuracy)是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，…般用回收率(recoveryrate，％)表示。准确度应在规定的范围内测试。
1.测定方法的准确度
可用已知纯度的对照品做加样回收率测定，于已知被测成分含量的供试品中再精密加入一定量的已知纯度的被测成分对照品依法测定，用实测值与供试品中含有量之差，除以加入对照品量计算回收率。加入对照品的量要适当，过小相对误差较大，过大真实性差；对照品的加入量与供试品中已知含有量之和必须在标准曲线的线性范围之内。
2.数据要求
在规定范围内，取同一浓度的供试品溶液，用6个测定结果进行评价；或设计3个不同浓度，各分别制备3份供试品溶液进行测定，用9个测定结果进行评价，一般中间浓度为所取供试品含量的100％水平，其他两个浓度分别为供试品含量的80％和120％«应报告供试品取样量、供试品中含有量、对照品加入量、测定结果和回收率计算值，以及回收率的相对标准偏差(RSD)或可信限。
(二)精密度
精密度(precision)是指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品经多次取样测定所得结果之间的接近程度。精密度一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。精密度验证内容包括重复性、中间精密度和重现性。
1，重复性(repeatability)
重复性是指在相同操作条件下，由同一个分析人员连续测定所得结果的精密度，亦称批内精密度。可在同一条件下对同一批样品制备至少6份以上供试品溶液(〃N6)，或设计3个不同浓度各分别制备3份供试品溶液(”=9)，进行测定，计算含量的平均值和相对标准偏差(RSD)，RSD值一般要求不大于5％。
2，中间精密度(intermediateprecision)
中间精密度是指在同一个实验室，在不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果之间的精密度。为考察随机变动因素对精密度的影响，应进行中间精密度试验，变动因素包括不同日期、不同分析人员、不同设备。
3，重现性(reproducibility)
重现性是指在不同实验室由不同分析人员测定结果之间的精密度。法定标准釆用的分析方法应进行重现性试验。如建立药典分析方法时，可通过协同检验得出重现性结果，协同检验的目的、过程和重现性结果均应记载在起草说明中。应注意重现性试验用样品本身的质量均匀性和储存运输过程中的环境影响因素，以免影响重现性结果。
（三）专属性
专属性（specificity）是指在其他成分可能存在的情况下，釆用的方法能正确测定出被测成分的特性，亦称为选择性（selectivity）。通常以不含被测成分的供试品作为空白样品，进行实验来说明方法的专属性。色谱法中被测成分的分离度应符合要求（N1.5）空白样品的色谱图中应在相应保留时间处无干扰峰。若无法制备空白样品，可采用二极管阵列检测器和质谱检测器进行峰纯度检査。
（四）检测限
检测限（limitofdetection，LOD）是指供试品中被测成分能被检测出的最低浓度或最小量，无须准确定量。通常以信噪比法测定，即用已知低浓度样品测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，计算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。一般以信噪比（S/N）为3：1或2：1时的相应浓度或注入仪器的量确定检测限。
（五）定量限
定量限（limitofquantification，LOQ）是指供试品中被测成分能被定量测定的最低量，其测定结果应具有一定准确度和精密度。该指标反映分析方法是否具备灵敏的定量检测能力。常用信噪比法测定定量限，一般以信噪比（SIN）为10：1时相应的浓度或注入仪器的量进行确定。
（六）线性
线性（linearity）是指在设计的范围内，测试结果与供试品中被测成分浓度直接成正比关系的程度。线性是定量测定的基础。
应在规定的范围内测定线性关系。可将储备液经精密稀释，或分别精密称样，制备一系列对照品溶液的方法进行测定，需至少制备5个浓度的对照品。以测得的响应信号作为被测成分的函数作图，观察是否呈线性，再用最小二乘法进行线性回归。必要时（如采用蒸发光散射检测器时），响应信号可经数学转换，再进行线性回归计算。线性关系的数据包括回归方程、相关系数和线性图，回归方程的相关系数G）越接近于1，表明线性关系越好。
（七）范围
范围（range）是指能达到一定准确度、精密度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。对于有毒性的、具特殊功效或药理作用的化学成分，其范围应大于被限定含量的区间。
（八）耐用性
耐用性（robustness）是指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为使方法用于常规检验提供依据。耐用性表明测定结果的偏差在可接受的范围内，以及测定条件的最大变动范围。开始研究分析方法时，就应考虑其耐用性。如果测试条件要求苛刻，则应在方法中注明。典型的变动因素有：被测溶液的稳定性、样品提取次数、提取时间等；液相色谱法中典型的变动因素有：流动相的组成或pH、不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱、柱温、流速等；气相色谱法中的变动因素有：不同厂牌或不同批号的色谱柱、固定相、不同类型的担体、柱温、进样口和检测器温度等。
经试验，应说明测定条件发生小的变动能否通过设计的系统适用性试验，以确保方法有效。
对于畲药中多类成分的同时分析，一般选择紫外、二极管阵列检测器分析有紫外吸收的成分。若成分没有紫外吸收，则可以选择通用型检测器，如蒸发光散射检测器、质谱检测器等。其中，质谱检测器更为专属和灵敏，与液相或气相色谱设备联用后可实现不同结构类型成分的同时检测。
传统的多指标含量测定要求种类繁多的对照品，当化学成分对照品难以获取、价格昂贵或稳定性差时，可以采用替代对照品测定法实现多成分的同时定量分析，以一测多评法最为常用，即使用一个对照品同时定量分析多个待测成分。其基本原理：依据在一定的范围（线性范围）内成分的量（浓度或质量）与检测器响应成正比的原理，符合朗伯-比尔定律。在多指标质量评价时，假设某样品中含有，•个组分，（1=1，2，…，k，…，贝），式中4•为组分峰面积，Ｗｉ为组分浓度。选取其中的一个组分&为参照物，建立组分*与其他组分四之间的相对校正因子心队WdWmXWW，由此可导出计算公式：脂阳曲（fmQ，其中4为内参物的峰面积，阿为内参物的浓度，九，为其他组分峰面积，厶为其他组分协的浓度。相对校正因子理论上为恒定值。为保证测定结果的准确性，待测成分与参照物以同类成分为宜，紫外检测器可行性最佳。待测成分的定位和相对校正因子的测定与耐用性考察是一测多评的关键因素。
用于定量分析的方法必须进行验证，以证明釆用的含量测定方法符合相应分析要求。验证内容包括：专属性、准确度、精密度、线性、范围、检测限、定量限、耐用性。
(―)准确度
准确度(accuracy)是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，…般用回收率(recoveryrate，％)表示。准确度应在规定的范围内测试。
1.测定方法的准确度
可用已知纯度的对照品做加样回收率测定，于已知被测成分含量的供试品中再精密加入一定量的已知纯度的被测成分对照品依法测定，用实测值与供试品中含有量之差，除以加入对照品量计算回收率。加入对照品的量要适当，过小相对误差较大，过大真实性差；对照品的加入量与供试品中已知含有量之和必须在标准曲线的线性范围之内。
2.数据要求
在规定范围内，取同一浓度的供试品溶液，用6个测定结果进行评价；或设计3个不同浓度，各分别制备3份供试品溶液进行测定，用9个测定结果进行评价，一般中间浓度为所取供试品含量的100％水平，其他两个浓度分别为供试品含量的80％和120％«应报告供试品取样量、供试品中含有量、对照品加入量、测定结果和回收率计算值，以及回收率的相对标准偏差(RSD)或可信限。
(二)精密度
精密度(precision)是指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品经多次取样测定所得结果之间的接近程度。精密度一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。精密度验证内容包括重复性、中间精密度和重现性。
1，重复性(repeatability)
重复性是指在相同操作条件下，由同一个分析人员连续测定所得结果的精密度，亦称批内精密度。可在同一条件下对同一批样品制备至少6份以上供试品溶液(〃N6)，或设计3个不同浓度各分别制备3份供试品溶液(”=9)，进行测定，计算含量的平均值和相对标准偏差(RSD)，RSD值一般要求不大于5％。
2，中间精密度(intermediateprecision)
中间精密度是指在同一个实验室，在不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果之间的精密度。为考察随机变动因素对精密度的影响，应进行中间精密度试验，变动因素包括不同日期、不同分析人员、不同设备。
3，重现性(reproducibility)
重现性是指在不同实验室由不同分析人员测定结果之间的精密度。法定标准釆用的分析方法应进行重现性试验。如建立药典分析方法时，可通过协同检验得出重现性结果，协同检验的目的、过程和重现性结果均应记载在起草说明中。应注意重现性试验用样品本身的质量均匀性和储存运输过程中的环境影响因素，以免影响重现性结果。
（三）专属性
专属性（specificity）是指在其他成分可能存在的情况下，釆用的方法能正确测定出被测成分的特性，亦称为选择性（selectivity）。通常以不含被测成分的供试品作为空白样品，进行实验来说明方法的专属性。色谱法中被测成分的分离度应符合要求（N1.5）空白样品的色谱图中应在相应保留时间处无干扰峰。若无法制备空白样品，可采用二极管阵列检测器和质谱检测器进行峰纯度检査。
（四）检测限
检测限（limitofdetection，LOD）是指供试品中被测成分能被检测出的最低浓度或最小量，无须准确定量。通常以信噪比法测定，即用已知低浓度样品测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，计算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。一般以信噪比（S/N）为3：1或2：1时的相应浓度或注入仪器的量确定检测限。
（五）定量限
定量限（limitofquantification，LOQ）是指供试品中被测成分能被定量测定的最低量，其测定结果应具有一定准确度和精密度。该指标反映分析方法是否具备灵敏的定量检测能力。常用信噪比法测定定量限，一般以信噪比（SIN）为10：1时相应的浓度或注入仪器的量进行确定。
（六）线性
线性（linearity）是指在设计的范围内，测试结果与供试品中被测成分浓度直接成正比关系的程度。线性是定量测定的基础。
应在规定的范围内测定线性关系。可将储备液经精密稀释，或分别精密称样，制备一系列对照品溶液的方法进行测定，需至少制备5个浓度的对照品。以测得的响应信号作为被测成分的函数作图，观察是否呈线性，再用最小二乘法进行线性回归。必要时（如采用蒸发光散射检测器时），响应信号可经数学转换，再进行线性回归计算。线性关系的数据包括回归方程、相关系数和线性图，回归方程的相关系数G）越接近于1，表明线性关系越好。
（七）范围
范围（range）是指能达到一定准确度、精密度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。对于有毒性的、具特殊功效或药理作用的化学成分，其范围应大于被限定含量的区间。
（八）耐用性
耐用性（robustness）是指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为使方法用于常规检验提供依据。耐用性表明测定结果的偏差在可接受的范围内，以及测定条件的最大变动范围。开始研究分析方法时，就应考虑其耐用性。如果测试条件要求苛刻，则应在方法中注明。典型的变动因素有：被测溶液的稳定性、样品提取次数、提取时间等；液相色谱法中典型的变动因素有：流动相的组成或pH、不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱、柱温、流速等；气相色谱法中的变动因素有：不同厂牌或不同批号的色谱柱、固定相、不同类型的担体、柱温、进样口和检测器温度等。
经试验，应说明测定条件发生小的变动能否通过设计的系统适用性试验，以确保方法有效。
