宁德市图书馆 内容
色谱分析法又称层析法，是指溶质因吸附、分配、溶解性能、分子大小或离子电荷等不同，在相对运动的两相系统中差速迁移而达到分离，从而对被分离的组分进行定性、定量分析的一种方法。根据分离方法的不同，色谱法可分为纸色谱法、薄层色谱法、柱色谱法、高效液相色谱法和气相色谱法等。由于色谱法的分离分析功能和高专属性等特点，被各国药典广泛用于各类药物的含量测定、杂质检查和鉴别试验。其中高效液相色谱法是畲药含量测定中使用率最高的一种方法。
（一）薄层色谱法
薄层色谱法（thin-layerchromatography，TLC）是将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与适宜的标准物质按同法所得的色谱图对比，亦可用薄层色谱扫描仪进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定。但由于定量技术更新迭代速度较快，薄层色谱法目前较少用于定量。标准物质包括化学对照品、对照提取物或对照药材等。对于有色物质，直接观察色斑；对于无色物质，可在紫外光（254nm或365nm）下检视，或喷显色剂加以显色，或在薄层硅胶中加入荧光物质，釆用荧光猝灭法检视。
薄层色谱鉴别法的建立原则是分离度好、图谱清晰、斑点明显、重现性好。系统适用性试验包括比移值（竹）、检出限、分离度（或分离效能）和相对标准偏差。比移值是指从基线至展开斑点中心的距离与从基线至展开剂的前沿距离的比值。
薄层色谱法具有简便、快速、灵敏、专属性强等优点，在中药及其制剂的鉴别中被广泛应用。仪器与材料、操作方法、系统适用性试验、测定法等内容参见《中国药典》四部通则0502“薄层色谱法”。
（二）高效液相色谱法
高效液相色谱法（highperformanceliquidchromatography，HPLC）是采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。高效液相色谱法具有分离效能高、专属性强、重现性好、精密准确等优点，是畲药含量测定的首选方法，用于鉴别时，要求供试品和对照品色谱峰的保留时间应一致。
根据固定相类型，高效液相色谱法可分为分配色谱、吸附色谱或离子交换色谱等。根据固定相与流动相极性大小，又可分为正相色谱法（NP-HPLC，通常为吸附机制）和反相色谱法（RP-HPLC，通常以分配机制为主）。RP-HPLC法最常用的填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，适合用于中等极性或非极性的弱酸、弱碱和中性化合物的分离分析，绝大部分化学成分可使用RP-HPLC法进行定量、定性分析。
高效液相色谱法中应用的检测器包括选择性检测器（紫外、二极管阵列、荧光、电化学检测器）和通用性检测器（示差折光、蒸发光散射检测器），前者响应值不仅与待测溶液的浓度有关，还与化合物的结构有关，而后者对所有化合物均有响应，此外还有更专属、更灵敏的质谱检测器。
各国药典对色谱系统的适用性试验均作了规定。在每次开机后，用规定的对照品对仪器进行调试，分析测试色谱柱的理论塔板数（柱效）、待测组分之间的分离度、重复进样色谱峰面积的精密度和色谱峰的拖尾因子，须达到规定的要求，保证分析的精确度。
对仪器的一般要求和色谱条件、系统适用性试验、测定法（内标法、外标法等）等内容参见《中国药典》四部通则0512"高效液相色谱法”。
随着分离科学的飞速发展，超高效液相色谱法（ultraperformanceliquidchromatography，UPLC）使液相色谱在更高水平上实现了突破。UPLC借助HPLC的理论和原理，利用小颗粒固定相（1.7nm）非常低的系统体积及快速检测手段等全新技术，使分离度、检测灵敏度及色谱峰容量等大大提高，从而全面提升了液相色谱的分离效能。与传统的HPLC相比，UPLC的分析速度、检测灵敏度及分离度分别是HPLC的9倍、3倍及1.7倍，因此大幅度节约了分析时间，节省了溶剂，很大程度上拓宽了液相色谱的应用范围。
（三）气相色谱法
气相色谱法（gaschromatography，GC）是釆用气体为流动相（载气）流经装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。物质或其衍生物气化后，被载气带入色谱柱进行分离，各组分先后进入检测器，用数据处理系统记录色谱信号。
气相色谱法具有分离效能高、专属性强、灵敏度高、重现性好、分析速度快等优点，但受样品蒸气压限制，主要用于具有挥发性成分的含量测定，同时可进行鉴别。挥发性小的样品需釆用衍生或裂解以增加挥发性，但操作繁琐，而且样品不易复原。因此，气相色谱法常用于含挥发油或其他挥发性成分的鉴别。气相色谱法系统适用性试验与鉴别方法同高效液相色谱法。
气相色谱法的色谱柱分为填充柱和毛细管柱。填充柱的材质为玻璃或不锈钢，内装吸附剂、高分子多孔小球或涂渍固定液的载体：毛细管柱的材质多为石英，内壁或载体经涂渍或交联固定液。气相色谱法用作流动相的载气有氮气、氢气和氢气。除另有规定外，常用载气为氮气。
气相色谱法的进样方式一般可釆用直接进样或顶空进样。检测器有多种，包括火焰离子化检测器（FID）、氮磷检测器（NPD）、火焰光度检测器（FPD）、电子捕获检测器（ECD）、热导检测器（TCD）、质谱检测器（MS）等。火焰离子化检测器对碳氢化合物响应良好，适合检测大多数的药物；氮磷检测器对含氮、磷元素的化合物灵敏度高；火焰光度检测器对含磷、硫元素的化合物灵敏度高；电子捕获检测器适于含卤素的化合物；质谱检测器还能给出供试品某个成分相应的结构信息，可用于结构确证。除另有规定外，一般用火焰离子化检测器，以氢气作为燃气，空气作为助燃气。
对仪器的一般要求、系统适用性试验、测定法等内容参见《中国药典》四部通则0521“气相色谱法”。
（一）薄层色谱法
薄层色谱法（thin-layerchromatography，TLC）是将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与适宜的标准物质按同法所得的色谱图对比，亦可用薄层色谱扫描仪进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定。但由于定量技术更新迭代速度较快，薄层色谱法目前较少用于定量。标准物质包括化学对照品、对照提取物或对照药材等。对于有色物质，直接观察色斑；对于无色物质，可在紫外光（254nm或365nm）下检视，或喷显色剂加以显色，或在薄层硅胶中加入荧光物质，釆用荧光猝灭法检视。
薄层色谱鉴别法的建立原则是分离度好、图谱清晰、斑点明显、重现性好。系统适用性试验包括比移值（竹）、检出限、分离度（或分离效能）和相对标准偏差。比移值是指从基线至展开斑点中心的距离与从基线至展开剂的前沿距离的比值。
薄层色谱法具有简便、快速、灵敏、专属性强等优点，在中药及其制剂的鉴别中被广泛应用。仪器与材料、操作方法、系统适用性试验、测定法等内容参见《中国药典》四部通则0502“薄层色谱法”。
（二）高效液相色谱法
高效液相色谱法（highperformanceliquidchromatography，HPLC）是采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。高效液相色谱法具有分离效能高、专属性强、重现性好、精密准确等优点，是畲药含量测定的首选方法，用于鉴别时，要求供试品和对照品色谱峰的保留时间应一致。
根据固定相类型，高效液相色谱法可分为分配色谱、吸附色谱或离子交换色谱等。根据固定相与流动相极性大小，又可分为正相色谱法（NP-HPLC，通常为吸附机制）和反相色谱法（RP-HPLC，通常以分配机制为主）。RP-HPLC法最常用的填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，适合用于中等极性或非极性的弱酸、弱碱和中性化合物的分离分析，绝大部分化学成分可使用RP-HPLC法进行定量、定性分析。
高效液相色谱法中应用的检测器包括选择性检测器（紫外、二极管阵列、荧光、电化学检测器）和通用性检测器（示差折光、蒸发光散射检测器），前者响应值不仅与待测溶液的浓度有关，还与化合物的结构有关，而后者对所有化合物均有响应，此外还有更专属、更灵敏的质谱检测器。
各国药典对色谱系统的适用性试验均作了规定。在每次开机后，用规定的对照品对仪器进行调试，分析测试色谱柱的理论塔板数（柱效）、待测组分之间的分离度、重复进样色谱峰面积的精密度和色谱峰的拖尾因子，须达到规定的要求，保证分析的精确度。
对仪器的一般要求和色谱条件、系统适用性试验、测定法（内标法、外标法等）等内容参见《中国药典》四部通则0512"高效液相色谱法”。
随着分离科学的飞速发展，超高效液相色谱法（ultraperformanceliquidchromatography，UPLC）使液相色谱在更高水平上实现了突破。UPLC借助HPLC的理论和原理，利用小颗粒固定相（1.7nm）非常低的系统体积及快速检测手段等全新技术，使分离度、检测灵敏度及色谱峰容量等大大提高，从而全面提升了液相色谱的分离效能。与传统的HPLC相比，UPLC的分析速度、检测灵敏度及分离度分别是HPLC的9倍、3倍及1.7倍，因此大幅度节约了分析时间，节省了溶剂，很大程度上拓宽了液相色谱的应用范围。
（三）气相色谱法
气相色谱法（gaschromatography，GC）是釆用气体为流动相（载气）流经装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。物质或其衍生物气化后，被载气带入色谱柱进行分离，各组分先后进入检测器，用数据处理系统记录色谱信号。
气相色谱法具有分离效能高、专属性强、灵敏度高、重现性好、分析速度快等优点，但受样品蒸气压限制，主要用于具有挥发性成分的含量测定，同时可进行鉴别。挥发性小的样品需釆用衍生或裂解以增加挥发性，但操作繁琐，而且样品不易复原。因此，气相色谱法常用于含挥发油或其他挥发性成分的鉴别。气相色谱法系统适用性试验与鉴别方法同高效液相色谱法。
气相色谱法的色谱柱分为填充柱和毛细管柱。填充柱的材质为玻璃或不锈钢，内装吸附剂、高分子多孔小球或涂渍固定液的载体：毛细管柱的材质多为石英，内壁或载体经涂渍或交联固定液。气相色谱法用作流动相的载气有氮气、氢气和氢气。除另有规定外，常用载气为氮气。
气相色谱法的进样方式一般可釆用直接进样或顶空进样。检测器有多种，包括火焰离子化检测器（FID）、氮磷检测器（NPD）、火焰光度检测器（FPD）、电子捕获检测器（ECD）、热导检测器（TCD）、质谱检测器（MS）等。火焰离子化检测器对碳氢化合物响应良好，适合检测大多数的药物；氮磷检测器对含氮、磷元素的化合物灵敏度高；火焰光度检测器对含磷、硫元素的化合物灵敏度高；电子捕获检测器适于含卤素的化合物；质谱检测器还能给出供试品某个成分相应的结构信息，可用于结构确证。除另有规定外，一般用火焰离子化检测器，以氢气作为燃气，空气作为助燃气。
对仪器的一般要求、系统适用性试验、测定法等内容参见《中国药典》四部通则0521“气相色谱法”。
